Ключовата разлика между RP HPLC и HIC е, че RP HPLC използва по-полярна подвижна фаза и по-малко полярна стационарна фаза. Докато HIC използва хидрофобна стационарна фаза, която позволява на хидрофобните молекули да се прикрепят към нея.
Хроматографията е аналитична техника, която помага да се раздели сместа на нейните компоненти. Първо, трябва да разтворим пробата, която да се раздели на разтвор. Тази смес разтвор-вещество се нарича подвижна фаза. След това подвижната фаза преминава през друг материал, наречен неподвижна фаза. Стационарната фаза определя разделянето на компонентите. Разделянето се получава поради разделянето на материала между подвижната фаза и неподвижната фаза.
Какво е RP HPLC?
Терминът RP HPLC означава високоефективна течна хроматография с обратна фаза. Включва разделяне на компонентите в смес според хидрофобността. Хидрофобните компоненти в подвижната фаза се свързват с имобилизираните хидрофобни лиганди на неподвижната фаза, докато хидрофилните компоненти се елуират през неподвижната фаза, без да се прикрепят към повърхността на неподвижната фаза.
Фигура 01: HPLC апарат
Освен това този метод има по-голяма възпроизводимост в сравнение с други хроматографски техники и също така показва широка приложимост. Затова ние използваме този метод в лабораториите за над 75% от всички HPLC методи. През повечето време използваме водна смес от вода със смесим полярен органичен разтворител като подвижна фаза. По този начин ще осигури прикрепването на хидрофобните компоненти в разтвора към повърхността на неподвижната фаза.
Какво е HIC?
Терминът HIC означава хидрофобна хроматография на взаимодействие. Това е вид обратнофазова HPLC и този метод се използва главно за разделяне на големи биомолекули като протеини. При този метод трябва да използваме водна среда, за да направим пробата от биомолекулата. Това е така, защото органичните разтворители могат да причинят денатуриране на протеините. Освен това, тази техника използва взаимодействието между големи молекули с леко хидрофобна повърхност на неподвижната фаза. Освен това, трябва да използваме висока концентрация на сол в пробата, тъй като това насърчава протеина да се задържи върху опаковката; този процес се нарича изсоляване. Чрез постепенно намаляване на концентрацията на сол можем да накараме биомолекулите да се елуират отделно според тяхната хидрофобност.
Обикновено този метод използва условия, противоположни на тези на йонообменната хроматография. При тази техника, първо, трябва да прекараме буферен разтвор през колоната, за да намалим солватацията на разтвореното вещество в пробата. Той кара хидрофобните области на протеина да се излагат. Въпреки това, когато молекулата е по-хидрофобна, е необходима по-малко сол за насърчаване на свързването. Тук по-слабо хидрофобните разтворени вещества се елуират първи и според промяната в концентрацията на сол, по-хидрофобните разтворени вещества се елуират последни.
Каква е разликата между RP HPLC и HIC?
Хроматографията е аналитична техника за разделяне на компоненти в смес. RP HPLC и HIC са две специализирани хроматографски техники. Ключовата разлика между RP HPLC и HIC е, че RP HPLC използва по-полярна подвижна фаза и по-малко полярна стационарна фаза, докато HIC използва хидрофобна стационарна фаза, която позволява на хидрофобните молекули да се прикрепят към нея.
Инфографиката по-долу обобщава разликата между RP HPLC и HIC.
Резюме – RP HPLC срещу HIC
Хроматографията е аналитична техника за разделяне на компоненти в смес. RP HPLC и HIC са две специализирани хроматографски техники. Ключовата разлика между RP HPLC и HIC е, че RP HPLC използва по-полярна подвижна фаза и по-малко полярна стационарна фаза, докато HIC използва хидрофобна стационарна фаза, която позволява на хидрофобните молекули да се прикрепят към нея.
