Ключовата разлика между HPLC с обратна фаза и нормална фаза е, че HPLC с обратна фаза използва неполярна стационарна фаза и полярна подвижна фаза, докато нормалната фаза HPLC използва полярна стационарна фаза и по-малко полярна подвижна фаза.
HPLC с нормална фаза е най-старата техника на HPLC, която Tswett използва при разделянето на растителни екстракти; той използва тебешир в стъклена колона. Това беше класическият режим на хроматография, който доведе до назоваването му като „нормална“техника. HPLC с обърната фаза, от друга страна, е обратното на нормалната техника, която учените разработиха напоследък.
Какво е HPLC с обратна фаза?
Обратно фазовата HPLC е хроматографска техника, при която използваме хидрофобна стационарна фаза. Сред всички HPLC методи, ние използваме този метод за приблизително 70% поради широката му приложимост и възпроизводимост. Стационарната фаза е неполярна, а подвижната фаза е полярна.
Повечето пъти учените използват водна смес от вода със смесим, полярен органичен разтворител, като ацетонитрил или метанол, като подвижна фаза. Следователно аналитите взаимодействат с неполярната стационарна фаза.
Какво е нормална фаза HPLC?
HPLC с нормална фаза е хроматографска техника, при която използваме хидрофилна стационарна фаза. Това е традиционният метод на HPLC, въпреки че не го използваме толкова много. Стационарната фаза е полярна, а подвижната фаза е неполярна. По-важното е, че подвижната фаза на тази техника е 100% органична. Това означава, че за това не се използва вода.
Фигура 01: Профил на проба за нормална фаза и обратнофазова HPLC хроматограма според полярността на компонентите в аналита.
Обикновено стационарната фаза съдържа силициев диоксид, циано, диол, амино свързани фази и др. Подвижните фази включват органични разтворители като хексан, етил ацетат и др. Тази техника се основава на задържането на молекули на разтворителя или аналита върху полярна стационарна фаза.
Каква е разликата между HPLC с обратна фаза и нормална фаза?
Обратно фазовата HPLC е хроматографска техника, при която използваме хидрофобна стационарна фаза. Стационарната фаза на тази техника е неполярна, докато подвижната фаза е полярна. Освен това учените използват водна смес от вода със смесим полярен органичен разтворител, като ацетонитрил или метанол, като подвижна фаза в обратнофазова HPLC. Обратно, нормалната фаза HPLC е хроматографска техника, при която използваме хидрофилна стационарна фаза. Стационарната фаза на тази техника е полярна, докато подвижната фаза е неполярна. В допълнение към това учените използват органични разтворители като хексан, етил ацетат и др. като подвижна фаза на нормална фаза HPLC. Инфографиката по-долу представя разликата между HPLC с обратна фаза и нормална фаза в таблична форма.
Резюме – HPLC с обратна фаза срещу нормална фаза
Техниките за HPLC с обратна фаза и нормална фаза са две техники за течна хроматография. Ключовата разлика между HPLC с обратна фаза и нормална фаза е, че HPLC с обратна фаза използва неполярна стационарна фаза и полярна подвижна фаза, докато нормалната фаза HPLC използва полярна стационарна фаза и по-малко полярна подвижна фаза.
