Ключовата разлика между конкурентния и неконкурентния ELISA е, че конкурентният ELISA използва инхибиращ антиген, докато неконкурентният ELISA не използва инхибиращ антиген за анализа.
Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) е имунологичен анализ, който открива различни цели като антитела, антигени, протеини и гликопротеини. Това е бърз и лесен метод за изпълнение. Следователно, по-често се използва за изследователски и диагностични цели. ELISA включва използването на ензими и специфичното свързване на антитяло и антиген. Въз основа на това как протичат реакциите, има четири вида ELISA: директен ELISA, индиректен ELISA, сандвич ELISA и инхибиращ ELISA. Директен, индиректен и сандвич ELISA са видове неконкурентна ELISA, докато инхибиращата ELISA е вид пълна ELISA. Основната цел на тази статия е да обсъди разликата между конкурентен и неконкурентен ELISA.
Какво е конкурентен ELISA?
Конкурентният ELISA измерва концентрацията на антиген в проба чрез откриване на смущения в сигнала. Тук анализът използва инхибиторен антиген. Следователно, това е вид инхибиране ELISA. По време на тази процедура присъстващите в пробата антигени се конкурират с избрания референтен антиген за свързване със специфично количество белязано антитяло. Освен това, тази процедура започва с инкубиране на пробата с излишното количество белязано антитяло. Също така референтният антиген трябва да бъде предварително покрит върху плака за анализ с множество ямки. След това сместа от пробата трябва да се добави към плочата за анализ, която съдържа референтния антиген. Свободните антитела ще се свържат с референтния антиген в зависимост от количеството антиген в пробата. Следователно, ако присъства повече антиген на пробата, ще бъде открит по-малко референтен антиген. Така той създава по-слаб сигнал.
Фигура 01: ELISA
За разлика от това, когато пробата съдържа по-малко количество антиген, все повече и повече референтен антиген ще заема антителата и ще дава силен сигнал. Тъй като конкурентният ELISA дава по-силен сигнал, когато пробата съдържа малко количество антигени, конкурентният ELISA е много чувствителен анализ, дори за проби с малък брой антигени.
В някои конкурентни комплекти ELISA се използва белязан антиген вместо белязано антитяло. Тук белязаният антиген и антигенът на пробата ще се конкурират за свързване с първичното антитяло. По същия начин, когато количеството антиген в пробата е ниско, количеството белязан антиген, което се свързва с антителата, ще бъде по-високо и ще създаде по-силен сигнал.
Какво е неконкурентна ELISA?
Измежду четирите вида ELISA, три вида са неконкурентни ELISA. Те са директен ELISA, индиректен ELISA и сандвич ELISA. И трите формата работят по общия принцип на ELISA с леки разлики в техните методологии.
Direct ELISA използва ензимно белязано първично антитяло. Следователно не изисква вторично антитяло. Следователно директният ELISA е по-бърз от другите видове ELISA. Първичното антитяло ще се свърже директно с имобилизирания целеви антиген, който присъства в плаката. Следователно ще се осъществи реакцията ензим-субстрат, произвеждайки видим сигнал.
Фигура 02: Сандвич ELISA
За разлика от директния ELISA, индиректният ELISA използва небелязано първично антитяло и ензимно белязано вторично антитяло. След като първичното антитяло се свърже с имобилизирания антиген, вторичното антитяло се свързва с първичното антитяло. Ензимът във вторичното антитяло ще реагира с антигена и ще произведе видим сигнал. Сандвич ELISA е различен както от директния, така и от индиректния ELISA. Тук антитялото е имобилизирано към стената на тестовата плака.
Какви са приликите между конкурентния и неконкурентния ELISA?
- Конкурентен и неконкурентен ELISA са два вида техники за имуносорбентен анализ.
- Те са много гъвкави и чувствителни техники.
- Освен това както конкурентният, така и неконкурентният ELISA са ензимно-свързани имуноанализи.
- Освен това и двата метода генерират сигнал поради реакция ензим-субстрат.
Каква е разликата между конкурентен и неконкурентен ELISA?
Конкурентният ELISA е вид ELISA, който разчита на завършването между аналитния антиген и белязания антиген за ограничено количество специфично антитяло. От друга страна, не съществува такава конкуренция между интересния антиген и референтния антиген в неконкурентния ELISA. По този начин това е ключовата разлика между конкурентния и неконкурентния ELISA. По същия начин конкурентният ELISA е инхибиращ ELISA, докато неконкурентният ELISA не е инхибиращ ELISA. Така че това също е разлика между конкурентен и неконкурентен ELISA.
Освен това конкурентният ELISA е по-подходящ за измерване на малко количество антиген, който представлява интерес. Това е чувствителен метод. От друга страна, неконкурентният ELISA не зависи от броя на антигените, присъстващи в пробата. Следователно това също е разлика между конкурентен и неконкурентен ELISA.
Инфографиката по-долу обяснява сравнително разликата между конкурентен и неконкурентен ELISA.
Обобщение – конкурентен срещу неконкурентен ELISA
Конкурентен и неконкурентен ELISA са двата основни типа ELISA или ензимно-свързан имуносорбентен анализ. Като обобщим разликата между конкурентен и неконкурентен ELISA, конкурентният ELISA разчита на конкуренцията между интересния антиген и референтния антиген спрямо ограниченото количество антитела. Следователно конкурентният ELISA се нарича също инхибиращ ELISA. От друга страна, неконкурентният ELISA не разчита на конкуренцията между целевите антигени и референтните антигени. Той използва излишък от белязано специфично антитяло към анализираното вещество, което представлява интерес. По този начин това е ключовата разлика между конкурентния и неконкурентния ELISA. Директен ELISA, индиректен ELISA и сандвич ELISA са трите основни вида неконкурентни ELISA.
