Ключова разлика – директен срещу индиректен ELISA
Ензимно-свързаният имуноанализ (ELISA), известен също като ензимен имуноанализ, е серологичен тест, който открива антитела в кръвта. Използва се като диагностичен инструмент, за да се установи дали пациентът е бил изложен на определен тип вирус или друг инфекциозен агент (антиген) и дали тялото е произвело антитела срещу инфекцията. ELISA може също да идентифицира минали и настоящи инфекции. Следователно ELISA често се използва като тест за предварителен скрининг от лекарите преди задълбочен анализ на заболяванията. Този тест може да се извърши в лабораторията, като се вземе кръвна проба от пациента. Има два вида ELISA тест: директен ELISA и индиректен ELISA. Ключовата разлика между директния и индиректния ELISA е, че индиректният ELISA е по-чувствителен и изисква добавяне на вторично антитяло, докато директният ELISA е по-малко чувствителен и използва само първично антитяло.
Какво е Direct ELISA?
ELISA е диагностичен тест за заболяване, извършван за идентифициране на наличието на определени антигени или антитела в кръвта. Извършва се като анализ на плоча. Той използва антитела, свързани с лесно анализируеми ензими. Наличието на антигени в серумната проба се свързва със специфични антитела, свързани с ензими. В последния етап се добавя специфичен субстрат, който да реагира с ензима. Ензимът превръща субстрата в оцветен или генериращ сигнал продукт. Промяната на цвета на химическия субстрат разкрива наличието на определено антитяло в серумната проба. Директният ELISA тест използва само първично антитяло, свързано с ензима. При свързване с антигена той бързо променя цвета си, което показва наличието на инфекциозния агент в кръвта. Въпреки това, интензитетът на сигналите е по-слаб при директен ELISA, тъй като епитопите са ограничени до свързване на антигените. Следователно директният ELISA е по-малко чувствителен в сравнение с индиректния ELISA.
Фигура 01: Директен ELISA тест
Какво е индиректен ELISA?
ELISA може да се извърши с помощта на два вида антитела, а именно; първично антитяло и вторично антитяло. Индиректният ELISA инструмент използва и двата вида антитела за усилване на сигналите за по-добро откриване. Индиректната ELISA техника се извършва, както следва.
- Плочите се инкубират с антигени и се промиват, за да се блокира неспецифичното свързване.
- След това първичните антитела се добавят и се промиват.
- Свързаното с ензим вторично антитяло се добавя и се измива.
- Добавя се субстрат и се оставя да реагира с ензими.
- Откриват се сигнали и се идентифицира наличието или отсъствието на специфичния антиген в пробата.
При индиректния тест ELISA няколко вторични антитела могат да се свържат с едно първично антитяло. Вторичните антитела са свързани с лесно анализируеми ензими. Следователно, едно свързване може да направи силен сигнал поради повече от едно взаимодействия. Следователно индиректният ELISA е по-чувствителен от директния ELISA. Индиректният ELISA обаче може да направи неспецифични сигнали поради кръстосани реакции на вторичните антитела.
Фигура 02: Индиректен ELISA тест
Каква е разликата между директен и индиректен ELISA?
Директно срещу индиректно ELISA |
|
| Директният ELISA е по-малко чувствителен в сравнение с индиректния ELISA. | Индиректният ELISA е по-чувствителен. |
| Отнето време | |
| Директният ELISA тест е бърз процес. | Индиректният ELISA отнема много време. |
| Използване на антитела | |
| Само един вид антитела (първични антитела) се използват в директен ELISA. | Първичните и вторичните антитела се използват за индиректен ELISA. |
| Връзка с ензими | |
| Първичните антитела са свързани с ензими. | Вторичните антитела са свързани с ензими. |
| Кръстосана реактивност на втори антитела | |
| Директният ELISA елиминира кръстосаната реактивност на вторите антитела. | Индиректният ELISA е засегнат от кръстосана реактивност на втори антитела. |
| Сигнали | |
| Сигналите са слаби в сравнение с индиректния ELISA. | Сигналите се усилват при индиректен ELISA. Следователно е лесно да се открие. |
Обобщение – Директен срещу индиректен ELISA
ELISA е биохимична техника, използвана главно в имунологията за откриване на наличието на антитяло или антиген в кръвна проба на пациент. Може да се извърши чрез два процеса, известни като директен или индиректен ELISA. Директният ELISA тест използва само първични антитела за откриване на антигена, докато индиректният ELISA използва както първични, така и вторични антитела. При директния ELISA първичните антитела се маркират, докато при индиректния ELISA вторичните антитела се маркират. Това е разликата между директен и индиректен ELISA.
