Ключовата разлика между Elisa и Elispot е, че Elisa е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който определя общата концентрация на секретирани сигнални протеини, докато Elispot е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който открива отделни цитокин-секретиращи клетки.
Elisa и Elispot са два ензимно-свързани имуносорбентни анализа, широко използвани в медицината, растителната патология, биотехнологиите и различни фармацевтични индустрии. При тези техники протеиновият аналит се открива от антитяло, насочено срещу него. Elisa е най-популярният ензимно-свързан имуносорбентен анализ, използван в лабораториите. От друга страна, Elispot е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който не се използва вместо Elisa, а по-скоро се използва в допълнение към Elisa в лабораториите.
Какво представлява тестът Elisa?
Elisa е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който определя общата концентрация на секретираните сигнални протеини. Това е широко използван аналитичен биохимичен анализ, описан за първи път от Engvall и Perlmann през 1971 г. Тази техника използва твърдофазен тип ензимен имуноанализ за откриване на наличието на специфичен протеин в течна проба с помощта на антитела, насочени срещу този специфичен протеин. Този анализ е често използван диагностичен инструмент в медицината, растителната патология и биотехнологиите.
Механизъм на теста ELISA
В по-голямата част от теста ELISA неизвестно количество антиген се имобилизира върху твърда подложка (микролитрова плака) в началото. След това съответстващото първично антитяло се нанася върху твърдата опорна повърхност. Това антитяло образува комплекс с антигена (комплекс антиген-антитяло). Свързаното с антиген първично антитяло може да бъде открито от вторично антитяло, което е свързано с ензим чрез биоконюгация. В последния етап от теста Elisa се добавя вещество, съдържащо субстрата на ензима. Ако има правилно свързване на първично антитяло към антигена, се получава откриваема промяна на цвета от субстрата. В крайна сметка това определя количествено антигена в пробата.
Фигура 01: Различни видове Elisa
Освен това има различни подходи към Elisa, като директна Elisa и непряка Elisa. Понастоящем се използват различни тестове Elisa за откриване на човешки патогени като Mycobacterium tuberculosis, ротавирус, вирус на хепатит B, вирус на хепатит C, E.coli, произвеждащ ентеротоксин, HIV и SARS-CoV-2.
Какво представлява Elispot Assay?
Elispot е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който открива отделни цитокин-секретиращи клетки. Сесил Черкински за първи път описва ELISpot през 1983 г. Това е вид анализ, който се фокусира върху количествено измерване на честотата на секреция на цитокини за една клетка. Също така се класифицира като техника, която използва антитела за откриване на биологичен или химичен протеинов анализатор. Анализът Fluorospot е разновидност на анализа Elispot, който използва флуоресценция, за да анализира множество аналити (по-секретни протеини).
Механизъм на теста Elispot
При този механизъм към ямките на микролитровите плаки първоначално се добавят цитокин специфични моноклонални антитела. След това желаните наблюдавани клетки се добавят към ямките. По-късно клетките се инкубират. По време на клетъчната инкубация, клетките се оставят да реагират на всякакви стимули и да секретират цитокини. Цитокините, които са били секретирани от инкубираните клетки, ще се прикрепят към антителата, тъй като клетките са заобиколени от цитокин специфични моноклонални антитела.
Фигура 02: Анализ Elispot
За откриване на тези специфични за цитокини моноклонални антитела, биотинилирани специфични антитела за откриване се добавят към ямката. Биотинилираните специфични антитела за откриване улавят специфичните за цитокин моноклонални антитела в ямките. Освен това към ямките се добавят стрептавидин-ензимни конюгати, за да се свържат с антителата за откриване. В последния етап към ямките се добавят специфични субстрати. Реакциите на ензимни конюгати и субстрати произвеждат различни петна в ямките. Тези отделни петна се четат на автоматизиран четец ELISpot. В крайна сметка това допълнително ще изчисли честотата на секреция на цитокини.
Какви са приликите между Elisa и Elispot?
- И двата са ензимно-свързани имуносорбентни анализи.
- И двата анализа откриват специфични протеинови аналити.
- Тези анализи използват специфични антитела за идентифициране на протеиновите аналити.
- И двата анализа използват ензими и субстрати.
- Използват се като диагностичен инструмент в медицински лаборатории.
Каква е разликата между Elisa и Elispot?
Elisa е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който определя общата концентрация на секретираните сигнални протеини. От друга страна, Elispot е ензимно-свързан имуносорбентен анализ, който измерва отделни клетки, секретиращи цитокини. И така, това е ключовата разлика между Elisa и Elispot. Освен това при теста Elisa антигенът първо се имобилизира върху микролитровите ямки. Обратно, при теста Elispot антитялото първо се имобилизира върху микролитровите ямки. По този начин, това е друга разлика между Elisa и Elispot.
Инфографиката по-долу представя подробен анализ на разликата между Elisa и Elispot в таблична форма.
Резюме – Elisa срещу Elispot
Elisa и Elispot са два ензимно-свързани имуносорбентни анализа, широко използвани в медицината, растителната патология, биотехнологиите и различни фармацевтични индустрии. Elisa открива наличието на лиганд (протеин) в течна проба с помощта на антитела, насочени срещу лиганда, който трябва да се измери. Elispot анализът е широко използван метод за проследяване на имунните отговори. Той открива отделни клетки, секретиращи цитокини, с помощта на антитела. Това е едновременно техника за имуноанализ и биоанализ. Така това е обобщението на разликата между Elisa и Elispot.
