Трансформация срещу трансфекция
Трансформацията и трансфекцията са две прости техники, използвани за въвеждане на чужд ген в клетка гостоприемник. Тези техники обаче зависят от типа хост или векторни системи.
Какво е клетъчна трансформация?
Трансформацията е техниката, използвана за въвеждане на гени в дрождеви и бактериални клетки. Тази техника обикновено причинява наследствени промени в гените и по този начин експресията на гена е постоянна. Бактериалната трансформация е представена за първи път през 1928 г. от Фредерик Грифит. След това в началото на 1970 г. тази техника е използвана в E.коли. По време на процеса на трансформация на E. coli, клетките се накисват в леденостуден разтвор на CaCl2 Тази стъпка прави клетките на E.coli компетентни. След това компетентните клетки се смесват с плазмидната ДНК и се инкубират върху лед за 20-30 минути. След това се прилага кратък топлинен шок, за да се даде възможност за трансфер на ДНК в клетката. Накрая, клетките се поставят в хранителна среда и се инкубират при 37 °C за 60-90 минути, за да се установят плазмидите. След като тези стъпки са успешно завършени, трансформираните клетки могат да бъдат поставени върху подходяща среда за размножаване на клетки. Тъй като трансформацията се счита за неефективна техника, тя не може да се използва за подготовка на банки за клонинги.
Какво е клетъчна трансфекция?
Трансфекцията е метод за въвеждане на чужд ген, обикновено в клетки на бозайник. Има два метода на трансфекция; а именно преходна трансфекция и стабилна трансфекция. При преходна трансфекция генната експресия е достъпна за ограничено време; по този начин, промяната на гена причинява временна експресия. Този метод на трансфекция е прост и бърз; следователно може да се използва рутинно. Един недостатък на преходната трансфекция е трудността при прилагане за широкомащабни системи за синтез на протеини.
По време на стабилна трансфекция, целевият ген се интегрира в генома на клетката гостоприемник и по този начин генната експресия е постоянна, за разлика от преходната трансфекция.
Каква е разликата между трансформация и трансфекция?
• Трансформацията е въвеждането на ген в прокариотна клетка (бактериална и дрождена), докато трансфекцията обикновено се нарича въвеждане на ген в клетка на бозайник.
• Трансформацията води до наследствена промяна в гените, докато трансфекцията може да доведе или до временна експресия, или до постоянни промени в гените.
