Ключовата разлика между FPLC и HPLC е, че FPLC е вид течна хроматография, която пречиства големи биомолекули като протеини, нуклеотиди и пептиди, докато HPLC е вид течна хроматография, която разделя съединения с ниско молекулно тегло.йени
Течната хроматография е техника, използвана за разделяне на проба на нейните отделни компоненти. Това разделяне възниква поради взаимодействието на специфични проби с подвижни и неподвижни фази. Компонентите в пробата се разделят въз основа на афинитета на всеки компонент към подвижната фаза в течната хроматография. Когато подвижната фаза и пробата преминават през колона, компонентите на пробата започват да се разделят на ленти, които могат да бъдат открити чрез UV-VIS спектроскопия. Следователно FPLC и HPLC са два вида техники за течна хроматография.
Какво е FPLC?
FPLC е вид течна хроматография, която пречиства големи биомолекули като протеини, нуклеотиди и пептиди. Бързата протеинова течна хроматография (FPLC) е разработена и пусната на пазара в Швеция от компанията Pharmacia през 1982 г. Тя често се използва за анализиране или пречистване на протеинови смеси. Това се извършва въз основа на принципа на афинитетите на компонентите на пробата към движеща се течност (подвижна фаза) и порест твърд материал (неподвижна фаза). В FPLC подвижната фаза е буфер, а неподвижната фаза е смола, съставена от перли. Обикновено се състои от омрежена агароза, опакована в цилиндрична стъклена или пластмасова колона.
Фигура 01: Апарат FLPC (бърза протеинова течна хроматография)
В по-голямата част от стратегията за FLPC се използва йонообменна смола. Следователно протеинът, който представлява интерес, ще се свърже със смолата чрез взаимодействие на заряда. Техниката FLPC също използва два буфера: буфер 1 (текущият буфер) и буфер 2 (елуиращият буфер). Първоначално, когато буферът и сместа от пробата преминават през колоната, протеинът, който представлява интерес в сместа, ще се свърже със смолата чрез взаимодействие на заряда. Но протеинът, който представлява интерес, се дисоциира и се връща в разтвора в елуиращия буфер, когато елуиращият буфер преминава през колоната в края на процеса. По-късно разтворът (елуент, който съдържа протеин от интерес) преминава през два детектора, които измерват концентрацията на сол и концентрацията на протеин. Тъй като всеки протеин се елуира, той се появява като "пик" по време на откриването и може да бъде събран за по-нататъшна употреба.
Какво е HPLC?
HPLC е вид течна хроматография, която разделя съединения с ниско молекулно тегло. През 1969 г. първият HPLC е произведен в търговската мрежа от Waters Corporation, САЩ. При високоефективна течна хроматография (HPLC), смес от проба (аналит) в разтворител (подвижна фаза) се изпомпва през колона с хроматографски опаковъчен материал (стационарна фаза) при високо налягане. Сместа от пробата се пренася от движещ се поток газ-носител от хелий или азот.
Фигура 02: HPLC (високоефективна течна хроматография)
Компонентите в сместа на пробата, които имат най-малко взаимодействие със стационарната фаза или най-голямо взаимодействие с подвижната фаза, ще излязат по-бързо от колоната. От друга страна, компонентите в сместа от пробата, които имат най-голямо взаимодействие със стационарната фаза или най-малко взаимодействие с подвижната фаза, ще напуснат колоната по-бавно. Въз основа на горния принцип на взаимодействие, компонентите на сместа от пробата могат да бъдат разделени. Освен това инструменталният детектор идентифицира всеки компонент от сместа на пробата, която излиза от колоната. HPLC се използва за проверка на екологични и биологични проби за наличие или отсъствие на известни съединения, като лекарства, токсини или пестициди. Използва се в различни индустрии като фармацевтична, екологична, криминалистика и химикали.
Какви са приликите между FPLC и HPLC?
- FPLC и HPLC са видове течна хроматография.
- И двете се използват за разделяне и идентифициране на биологични проби.
- Те имат течна подвижна фаза и твърда неподвижна фаза.
- И двете техники използват колона за преминаване през извадката.
- Тези техники използват помпи, детектори, клапани и софтуер за разделяне и откриване на проби.
Каква е разликата между FPLC и HPLC?
FPLC е вид течна хроматография, която се използва за пречистване на големи биомолекули като протеини, нуклеотиди и пептиди. HPLC е вид течна хроматография, която се използва за разделяне на съединения с ниско молекулно тегло. И така, това е ключовата разлика между FPLC и HPLC. Освен това FPLC използва монитори за pH и проводимост, както и фракционни колектори. Обратно, HPLC не използва монитори за рН и проводимост и колектори на фракции.
Инфографиката по-долу изброява повече разлики между FPLC и HPLC в таблична форма.
Резюме – FPLC срещу HPLC
Хроматографията е лабораторна аналитична техника, използвана за разделяне на компоненти от смес. Разделя се на няколко типа като колонна хроматография, газова хроматография, течна хроматография, йонообменна хроматография и т.н. FPLC и HPLC са два вида техники за течна хроматография. FPLC е вид течна хроматография, която се използва за пречистване на големи биомолекули като протеини, нуклеотиди и пептиди. От друга страна, HPLC е вид течна хроматография, която се използва за разделяне на съединения с ниско молекулно тегло. Така това е обобщението на разликата между FPLC и HPLC.
