Ключова разлика – имунофлуоресценция срещу имунохистохимия
Диагностиката на заболяванията, която използва молекулярно-биологични методи, се превърна в нововъзникваща област на клиничните лабораторни технологии. Включва всички тестове и методи за идентифициране на заболяване и разбиране на причината за заболяване чрез анализиране на ДНК, РНК или експресирани протеини в организъм. Бързият напредък в молекулярната диагностика даде възможност за основни изследвания на заразни и незаразни болести. Те се използват за определяне на промени в последователността или нивата на експресия в ключови гени или протеини, участващи в заболяването. Имунофлуоресценцията (IF) и имунохистохимията (IHC) са две такива широко използвани техники в биологията на рака. IF е вид IHC, при който се използва метод за откриване на флуоресценция за анализиране на моноклонални и поликлонални антитела, докато IHC използва базирани на химикали методи за откриване на моноклонални и поликлонални антитела. Това е ключовата разлика между IF и IHC.
Какво е имунофлуоресценция (IF)?
Имунофлуоресценцията е техника за откриване, при която антителата, използвани в анализа, се маркират с помощта на флуоресцентни багрила или флуоресцентни протеини за целите на откриването. Маркираните вторични антитела могат да доведат до нежелани фонови сигнали; следователно, IF техниката се основава на маркиране на самото първично антитяло в момента, за да се избегнат нежелани сигнали по време на откриване. Чрез тази техника се предотвратява неспецифичното свързване между първичното и вторичното антитяло и то е по-бързо, тъй като не е включен вторичен етап на инкубация. Качеството на данните също е подобрено.
Фигура 01: Двойно имунофлуоресцентно оцветяване за BrdU, NeuN и GFAP
Флуорохромите или флуоресцентните багрила са съединения, които могат да абсорбират радиация, за предпочитане ултравиолетова радиация, която се възбужда. Когато частиците достигнат основното състояние от възбудено състояние, те излъчват радиация, която се улавя и открива от детектор, за да образува спектър. От голямо значение е флуоресцентният етикет да е съвместим и стабилен за конкретната реакция и да бъде правилно конюгиран с антитялото, за да се получат точни резултати. Един от най-използваните флуорохроми е флуоресцеин изотиоцианат (FITC), който е със зелен цвят, с пикови дължини на вълната на абсорбция и излъчване съответно 490 nm и 520 nm. Родаминът, друг агент, използван в IF, е червен на цвят и има различни пикови дължини на вълната на абсорбция и излъчване от 553 nm и 627 nm.
Какво е имунохистохимия (IHC)?
IHC е метод за молекулярен тест, практикуван с цел идентифициране и потвърждаване на присъствието на антигена в клетката-мишена. Целевата клетка може да бъде инфекциозна частица, микробен патоген или злокачествена туморна клетка. IHC използва моноклонални и поликлонални антитела, за да определи наличието на антигени, присъстващи на клетъчната повърхност на таргетните клетки. Техниката се основава на свързване на антиген-антитяло. Маркер за откриване се конюгира с тези антитела, за да се открие наличието или отсъствието на конкретния антиген. Тези маркери могат да бъдат химични маркери като ензими, флуоресцентно маркирани антитела или радиомаркирани антитела.
Фигура 02: Срез от мозък на мишка, оцветен чрез имунохистохимия
Най-популярното приложение на IHC е в биологията на раковите клетки за идентифициране на наличието на злокачествени тумори, но се използва и за откриване на инфекциозни заболявания.
Какви са приликите между имунофлуоресценцията и имунохистохимията?
- Имунофлуоресценцията и имунохистохимията се извършват при in vitro условия.
- И двете техники се основават на антиген-антитяло
- И двете са много бързи техники.
- Резултатите от техниките са възпроизводими.
- И двете имат подобрено качество на данните.
- Тези техники, използвани при диагностика на рак и инфекциозни заболявания.
Каква е разликата между имунофлуоресценцията и имунохистохимията?
Имунофлуоресценция срещу имунохистохимия |
|
| IF е техника за откриване, при която антителата, използвани в анализа, се маркират с помощта на флуоресцентни багрила или флуоресцентни протеини за откриване. | IHC е техника за откриване, при която антителата, използвани в анализа, се маркират с помощта на химикали или радиоактивни елементи за откриване. |
| Точност | |
| Точността е по-висока при IF техниката в сравнение с IHC. | Точността е по-ниска при IHC. |
| Специфичност | |
| АКО е по-конкретно. | IHC е по-малко специфичен. |
Резюме – Имунофлуоресценция срещу имунохистохимия
Молекулярните механизми доведоха до много промени в областта на медицината, пораждайки усъвършенствани методи за молекулярно изследване, които доведоха до революции в областта на диагностиката. Тези изобретения доведоха до бърза и точна идентификация и потвърждение на болестта, като по този начин позволиха успешното прилагане и производство на лекарства. Тези техники се използват и във фармакологията, за да се намерят мишените на лекарствата и да се потвърдят фармакокинетичните свойства на лекарството по време на метаболизма на лекарството. IF и IHC са два диагностични метода, които се основават на концепцията за свързване на антиген и антитяло, въпреки че начинът на откриване при двете техники се различава. IF използва принципа на флуоресценцията за откриване на антигена, а IHC използва концепцията за химично конюгиране за откриване на антигена. Това е разликата между IF и IHC.
Изтеглете PDF версия на Имунофлуоресценция срещу Имунохистохимия
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката за цитиране. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между имунофлуоресценцията и имунохистохимията.
