Ключовата разлика между BCA и анализа на Брадфорд е, че анализът на ВСА отнема време и е по-малко точен, докато анализът на Брадфорд е бърз и точен.
BCA и анализът на Брадфорд са два метода за определяне на протеиновата концентрация. Тези два анализа имат различни принципи на анализ и разлики в тяхната точност.
Какво е BCA анализ?
BCA анализ или анализ на бицинхонинова киселина е биохимичен анализ, полезен при определяне на общата концентрация на протеин в разтвор. Този метод е наречен също като анализ на Смит на името на неговия изобретател Пол К. Смит. Този аналитичен метод показва прилики с протеинов анализ на Лоури, протеинов анализ на Брадфорд или биуретов реагент. Можем да наблюдаваме общата концентрация на протеин в дадена проба чрез промяна на цвета на разтвора на пробата, който преминава от зелено към лилаво. Тази промяна на цвета става пропорционално на съдържанието на протеин. След това можем да използваме колориметрична техника, за да анализираме интензитета на цвета и протеиновото съдържание в пробата.
BCA метод за оценка на протеин
Когато се разглежда механизмът на BCA анализ, типичният BCA разтвор съдържа силно алкален разтвор с рН от почти около 11,25 и съставките в този разтвор включват бицинхонинова киселина, натриев карбонат, натриев бикарбонат, натриев тартарат и меден (II) сулфат пентахидрат. Този анализ зависи главно от две химични реакции: редукция на мед(II) до мед(I) чрез пептидните връзки в протеина и хелатиране на две молекули бицинхонинова киселина с меден(I) йон, което води до пурпурно оцветен комплекс, който може абсорбират светлина при дължина на вълната 562 nm. При първата реакция количеството мед (II), редуцирано от пептидни връзки, е пропорционално на количеството протеин в пробата.
Какво представлява анализът на Брадфорд?
Тестът на Брадфорд е спектроскопски аналитичен метод, полезен при измерване на концентрацията на протеин в разтвор. Този метод е разработен от Марион М. Брадфорд през 1976 г. и е сравнително бърз и точен метод.
Цветна реакция на протеин и реагент на Брадфорд
Можем да използваме този метод, за да определим концентрацията на количеството протеин в проба. Химическата реакция, която протича в пробата по време на този анализ, зависи единствено от аминокиселинния състав на протеина в пробата.
Метод на Брадфорд за оценка на протеин
Когато разглеждаме метода на този анализ, това е колориметричен протеинов анализ, който се основава на изместването на абсорбцията на багрилото, наречено Coomassie Brilliant Blue G-250. Обикновено това багрило съществува в три форми като анионна (синя), неутрална (зелена) форма и катионна (червена) форма. Следователно при киселинни условия багрилото променя цвета си от червено на синьо. Това се дължи на свързването на протеина с багрилото. За разлика от това, ако няма протеин, който да се свърже с боята, промяната на цвета не се появява, разтворът придобива червено-кафяв цвят. Това багрило е способно да образува силен, нековалентен комплекс с карбоксилната група на протеина чрез силите на Ван дер Ваал и електростатично привличане.
Каква е разликата между BCA и Bradford Assay?
BCA и анализът на Брадфорд са два метода за определяне на протеиновата концентрация. Тези два анализа имат различни принципи на анализ и разлики в тяхната точност. Основната разлика между BCA и анализа на Брадфорд е, че анализът на ВСА отнема време и е по-малко точен, докато анализът на Брадфорд е бърз и точен.
Следната инфографика обобщава разликите между BCA и анализа на Брадфорд в таблична форма.
Обобщение – BCA срещу Bradford Assay
BCA анализ или анализ на бицинхонинова киселина е биохимичен анализ, полезен при определяне на общата концентрация на протеин в разтвор. Тестът на Брадфорд е спектроскопичен аналитичен метод, полезен при измерване на концентрацията на протеин в разтвор. Основната разлика между BCA и Брадфорд анализ е, че BCA отнема време и е по-малко точен, докато Брадфорд анализ е бърз и точен.
