PCR срещу PCR в реално време
PCR или полимеразната верижна реакция е революционно откритие в съвременната молекулярна биология, което е разработено за първи път от химика Кари Мулис през 1983 г. То позволява една последователност в сложна ДНК да бъде амплифицирана за анализ. Основната идея на PCR е, че два праймера, които са комплементарни на противоположните вериги на ДНК последователност, са ориентирани един към друг; праймерите произвеждат допълващи се нишки, всяка от които съдържа другия праймер. Следователно резултатът е голямо количество последователност, съответстваща на ДНК, която се намира между двата праймера. Ензимът ДНК полимераза се използва за удължаване на праймерите в PCR. ДНК полимеразата е термостабилен ензим и има способността да оцелява при високи температури (94 до 95 °C), използвани за денатуриране на шаблонна ДНК.
PCR включва три стъпки, а именно повтарящи се кръгове на денатурация, отгряване на праймери и синтез на ДНК. Термоциклираща машина се използва за извършване на тази реакция, така че да може да се програмира да променя температурите бързо и точно. Приложенията на PCR са криминални разследвания, ДНК пръстови отпечатъци, откриване на патогени и анализ на ДНК на ранни човешки видове.
Какво е конвенционален PCR?
Има три основни етапа на конвенционалната PCR, а именно; Етап на амплификация на ДНК, отделяне на PCR и откриване на продукти. Разделянето на ДНК сегменти обикновено се извършва чрез електрофореза в агарозен гел. След това продуктите се оцветяват с етеидуим бромид. И накрая, откриването се постига чрез визуализиране на ивици върху гелове под UV светлина. Следователно крайните резултати от конвенционалната PCR не се изразяват като числа. Обикновено конвенционалната PCR е в състояние да открие само един параметър.
Какво е PCR в реално време?
PCR в реално време може да открие амплификацията на продуктите, докато продуктите се синтезират. С развитието на технологиите PCR се превърна в много популярна техника, особено за откриване и идентифициране на бактерии в храни. PCR в реално време използва система за флуоресцентно багрило и термоциклер, оборудван с възможност за флуоресцентно откриване.
Каква е разликата между конвенционалната PCR и PCR в реално време?
• Конвенционалната PCR отнема повече време, тъй като използва гел електрофореза за анализ на амплифицираните PCR продукти. Обратно, PCR в реално време отнема по-малко време, тъй като може да открие амплификации по време на ранните фази на реакцията.
• PCR в реално време събира данни във фазата на експоненциален растеж на PCR, докато традиционният PCR събира данни в крайната точка на реакцията.
• Крайните резултати от конвенционалната PCR може да не са много точни, но резултатите от PCR в реално време са много точни.
• PCR в реално време е по-чувствителен от конвенционалния PCR.
• Конвенционалната PCR има много лоша резолюция, докато PCR в реално време може да открие много малки промени поради високата разделителна способност.
• Откриването на крайна точка на конвенционален PCR има кратък динамичен обхват, докато откриването на PCR в реално време има широк динамичен обхват.
• За разлика от конвенционалната PCR, автоматизираните техники за откриване се намират в PCR в реално време.
• Конвенционалната PCR е много сложна и трудоемка повече от PCR в реално време.
• За разлика от PCR в реално време, конвенционалната PCR не може да прави разлика между мъртви и живи бактерии.
• PCR в реално време използва флуоресцентна система за багрило за откриване на продуктите, докато конвенционалната PCR използва етидиев бромид и UV светлина за визуализиране на ивици в средата на агарозния гел.
