Ключова разлика – гел електрофореза срещу SDS страница
Гел електрофорезата е техника, която разделя макромолекулите в електрическо поле. Това е общ метод в молекулярната биология за разделяне на ДНК, РНК и протеини от смеси според техните молекулни размери. SDS Page е вид гел електрофореза, която се използва за отделяне на протеини от протеинова смес въз основа на техните размери. Гел електрофореза е термин, използван за означаване на нормалната техника, прилагана за разделяне на ДНК, РНК и протеини, докато SDS Page е един вид гел електрофореза. Това е основната разлика между гел електрофореза и SDS Page.
Какво е гел електрофореза?
Електрофореза с гел е обичайна техника, използвана в лабораториите за отделяне на заредени молекули като ДНК, РНК, протеини и др. от техните смеси. При гел електрофореза се използва гел. Действа като молекулярно сито. Има два вида гелове, използвани в гел електрофореза, а именно агарозен и полиакриламиден. Изборът на гел и подготовката на гел са важни фактори, които трябва да се имат предвид при гел електрофореза, тъй като размерът на порите на гела трябва да се манипулира внимателно за добро разделяне на молекулите чрез гел електрофореза. Гел електрофорезата има електрическо поле, свързано с два края на гела. Единият край на гела показва положителен заряд, докато другият край е отрицателно зареден.
ДНК и РНК са отрицателно заредени молекули. След като бъдат заредени в гела от отрицателния край на гела и приложени към електрическото поле, те мигрират през порите на гела към положително заредения край на гела. Скоростта на миграцията зависи от заряда и размера на молекулата. По-малките молекули лесно мигрират през порите на гела, отколкото по-големите молекули. Следователно по-малките молекули пътуват на голямо разстояние през гела, а по-големите молекули пътуват на кратко разстояние. За да се наблюдава движението на молекулите върху гела, се използват специални видове багрила. Електрическото поле се прилага за определен период от време и се спира, за да се предотврати загубата на молекули и да се задържат молекулите в техните изминати позиции. В гела могат да се наблюдават различни ивици. Тези ленти представляват молекули с различни размери. Следователно гел електрофорезата е полезна за разграничаване на молекулите според техните размери.
Гел електрофорезата е включена в различни техники като препаративна техника в молекулярната биология като PCR, RFLP, клониране, ДНК секвениране, Southern blotting, геномно картографиране и др.
Фигура 01: Електрофореза с агарозен гел
Какво е SDS страница?
Електрофореза с полиакриламиден гел с натриев додецилсулфат (SDS Page) е вид гел електрофореза, използвана за разделяне на протеини. Когато се използва гел електрофореза за разделяне на протеини, са необходими специални лечения, тъй като протеините не са отрицателно заредени като ДНК и РНК и не мигрират към положителния или отрицателния край. Следователно, протеините са денатурирани и покрити с отрицателен заряд преди гел електрофореза. Извършва се с помощта на детергент, наречен натриев додецил сулфат (SDS). Геловата електрофореза, която използва SDS и полиакриламиден гел за поддържаща среда, е известна като SDS Page. Тази техника обикновено се използва в биохимията, генетиката, криминалистиката и молекулярната биология.
По време на SDS Page, протеините се смесват с SDS. SDS разгръща протеините в линейна форма и ги покрива с отрицателен заряд, пропорционален на тяхната молекулна маса. Поради отрицателния заряд, протеиновите молекули мигрират към края на гела с положителен заряд и се разделят според техните молекулни маси. В SDS Page полиакриламидът се използва като твърда подложка за гела. Действителното разделяне на протеините зависи главно от свойствата на гела. Следователно приготвянето на полиакриламиден гел трябва да се извършва внимателно и трябва да се използват правилни концентрации на полиакриламид. Полиакриламидните гелове показват висока разделителна способност от агарозните гелове. Следователно SDS Page се счита за техника с висока разделителна способност за разделяне на протеини.
SDS Page е вид денатурираща гел електрофореза. Има голямо ограничение при анализа на протеини. Тъй като SDS денатурира протеините преди разделянето, той не позволява откриването на ензимна активност, протеинови свързващи взаимодействия, протеинови кофактори и др.
Фигура 02: Страница SDS
Каква е разликата между гел електрофореза и SDS Page?
Гел електрофореза срещу SDS Страница |
|
| Гел електрофорезата е метод, използван за разделяне на макромолекули с помощта на електрическо поле. | SDS Page е техника за гел електрофореза с висока разделителна способност, използвана за разделяне на протеини въз основа на тяхната маса. |
| Gel Run | |
| Може да се изпълнява по хоризонтален или вертикален начин. | SDS страницата винаги върви вертикално. |
| Основание за раздяла | |
| Разделянето става според заряда и размера. | Разделянето на протеини става според масата и заряда. |
| Резолюция | |
| Електрофорезата с агарозен гел има ниска разделителна способност, а електрофорезата с полиакриламиден гел има по-висока резолюция | SDS страницата е с по-добра разделителна способност. |
| Денатурация | |
| Електрофореза с гел включва както денатуриращи, така и неденатуриращи техники. | SDS Page денатурира протеини преди разделяне. |
Резюме – гел електрофореза срещу SDS страница
Гел електрофорезата е обичайна техника, използвана за разделяне и анализ на ДНК, РНК и протеини въз основа на техния размер и заряд. Има два основни вида електрофореза с гел, а именно електрофореза с агарозен гел и електрофореза с полиакриламиден гел. Агарозните гелове се използват главно за разделяне на нуклеинова киселина; когато се изисква по-висока резолюция, се използват полиакриламидни гелове. SDS Page е вид гел електрофореза, обикновено използвана за разделяне на сложни смеси от протеини. Счита се за техника за разделяне на протеини с висока разделителна способност. Това е разликата между гел електрофореза и SDS Page.
