Ключовата разлика между колориметричния и флуорометричния анализ е, че колориметричният анализ определя концентрацията на оцветени съединения в разтвор, докато флуорометричният анализ определя кинетичния механизъм на разтвора.
Биохимичният анализ е техника, която открива или количествено определя активността на биологична молекула или вещество аналитично. Това е ин витро процес. Колориметричният анализ и флуорометричният анализ са два типа общи биохимични анализи, извършвани в лаборатории. Множество техники като ELISA и Western blotting също са сложни биохимични анализи за количествено определяне на метаболитната активност и измерване на функционалното поведение на биомолекули като протеини, ензими и други малки молекули. Тези типове анализи се използват за идентифициране на взаимодействия протеин-ДНК, протеин-РНК и протеин-протеин.
Какво е колориметричен анализ?
Колориметричният анализ е техника, която определя концентрацията на оцветени съединения в разтвор. С други думи, колориметричният анализ е реакция, която води до промяна на цвета поради ензимна или химическа реакция между реагентите и аналитите. Колориметричните анализи се практикуват в биохимията за тестване на ензими, специфични съединения, хормони, антитела и други аналити. Те използват колориметри или спектрофотометри. Колориметрите са инструменти, които характеризират цветни проби, за да осигурят обективна мярка на цветовите характеристики. Спектрофотометърът е устройство, което измерва интензитета на светлината като функция на цвета или дължината на вълната на светлината.
Фигура 01: Колориметричен анализ
Как работи колориметричният анализ?
При колориметричен анализ се приготвя плака с определено антитяло, свързано с ямките. След това се добавя пробата. Това може да позволи на пробата да се свърже с антитялото. След това антитяло за откриване и субстрат се добавят към ямките, за да реагират със сондата за откриване. Стоп разтворът се добавя в края преди отчитането. Празна ямка, наречена празна проба, остава без пробата. При колориметричния анализ, колкото по-тъмен е цветът, толкова по-голяма е концентрацията на аналита. Обикновено е необходима само една дължина на вълната, за да се отчете. Но ако има референтно измерване, се използват две или повече дължини на вълната.
Какво е флуорометричен анализ?
Флуорометричният анализ е техника, която определя кинетичния механизъм на ензимните реакции. Провежда се флуорометричен анализ с образуване на флуоресцентен продукт от нефлуоресцентен субстрат или обратно. Този анализ също така използва флуоресцентен резонансен трансфер на енергия (FRET), където ензимната реакция променя позицията на два флуорофора в субстрата, като по този начин променя интензитета на флуоресценцията.
Фигура 02: Флуорометричен анализ
Флуорометричните анализи обикновено са много по-чувствителни от другите анализи. Диагностичните оценки на ензима в тъканни, клетъчни или течни проби на пациенти се увеличават поради по-високата му чувствителност.
Как работи флуорометричният анализ?
При флуорометричен анализ към пробата в плаката се добавя субстрат и флуоресцентният отговор се взема с помощта на четеца на плаки. Тук всяка клетка се измерва отделно. Непрозрачните плаки се използват при флуорометрични анализи. Това намалява разсейването на светлината. За този тип анализ са необходими две дължини на вълната. Едната дължина на вълната е за откриване на възбуждането, а другата дължина на вълната е за излъчването.
Какви са приликите между колориметричния и флуорометричния анализ?
- Колориметричният анализ и флуорометричният анализ са два вида биохимични анализи.
- И двата анализа се извършват за медицинска диагностика.
- Тези анализи включват ензимна реакция.
- И двата анализа включват субстрат и аналити.
Каква е разликата между колориметричен и флуорометричен анализ?
Колориметричният анализ е техника, която определя концентрацията на оцветени съединения в разтвор, докато флуорометричният анализ е техника, която определя кинетичния механизъм на ензимните реакции. И така, това е ключовата разлика между колориметричния и флуорометричния анализ. Освен това, флуорометричните анализи са по-чувствителни от колориметричните анализи; по този начин флуорометричните анализи имат способността да откриват повече аналити. По този начин това е друга важна разлика между колориметричния и флуорометричния анализ. Освен това флуорометричните анализи изискват две дължини на вълната, докато колориметричните анализи се извършват с една дължина на вълната.
Инфографиката по-долу представя в таблица повече разлики между колориметричен и флуорометричен анализ.
Обобщение – Колориметричен срещу флуорометричен анализ
Биохимичният анализ е аналитичен процес, използван за определяне и количествено определяне на клетъчните метаболитни реакции. Колориметричният анализ и флуорометричният анализ са два вида биохимични анализи. Колориметричният анализ е реакция, която води до промяна на цвета поради ензимна или химическа реакция между реагенти и аналити, докато флуорометричният анализ е техника, която се използва за определяне на кинетичния механизъм на ензимните реакции. И двата анализа зависят от ензимна реакция, която включва субстрат и аналит. Флуорометричните анализи са по-чувствителни от колориметричните анализи. Най-важното е, че флуорометричните анализи изискват две дължини на вълната, докато колориметричните анализи могат да се извършват само с една дължина на вълната. Така това обобщава разликата между колориметричен и флуорометричен анализ.
