Ключовата разлика между микронуклеарния и кометния анализ е, че микронуклеарният анализ е важен за проверка на хромозомните увреждания като последица от излагане на мутаген, докато кометният анализ е важен за откриване на първично увреждане на ДНК в отделни клетки.
Тестовете за генотоксичност помагат да се оценят възможностите за мутации и хромозомни аномалии. Генотоксините включват химически вещества и радиация. Канцерогените, мутагените и тератогените са основните категории генотоксини. Те причиняват различни увреждания като точкови мутации, делеции, скъсвания на единична и двойна верига, хромозомни аберации, образуване на микроядра, възстановяване на ДНК и взаимодействия на клетъчния цикъл. Такива състояния могат да доведат до голямо разнообразие от заболявания и анализите за генотоксичност предотвратяват потенциалните щети от тези състояния. Микроядреният анализ и кометният анализ са две техники при анализите за генотоксичност.
Какво представлява микронуклеарен анализ?
Микронуклеарният анализ е анализ за оценка на хромозомните увреждания като последица от излагане на мутаген. Важно е при скрининга на химикали, които причиняват образуване на вретено и микроядра. Микроядреният анализ предоставя информация за стабилността на химикалите, когато се намесват в хромозомната структура и функция. Много канцерогени са положителни при микронуклеарни тестове. Процесът на анализ включва химическо третиране и измерване на честотата на клетки с микроядра. Ако има необичайно увеличение на броя на клетките с микроядра, се заключава, че химикалът предизвиква хромозомно увреждане.
Микронуклеарен анализ обикновено се извършва върху активно делящи се клетки. Следователно, еритроцитите и стволовите клетки от костен мозък, произведени чрез клетъчно делене, са идеални кандидати за такива анализи. Те изпитват постоянен и бърз оборот. Тъй като еритроцитите нямат истински ядра, това прави клетките с микроядра по-видими в края на анализа.
Фигура 01: Наблюдение на микроядрения анализ
Микронуклеарните анализи са икономични, по-бързи, удобни и изискват по-малко умения за извършване. Те отразяват бързо хромозомните аберации по надежден начин и са изключително полезни за бърза оценка на хромозомните увреждания. Специален и многофункционален тип микронуклеарен анализ е цитокинетичният блок микронуклеарен цитом (CBMNcyt). Това е предпочитаният анализ за измерване на хромозомни увреждания и нестабилност в клетките. Въпреки това, основният проблем при използването на микронуклеарен анализ е, че той не може да определи различни видове хромозомни аберации и анализът оказва влияние върху митотичната скорост и съотношението на клетъчната смърт, което води до промяна на резултатите.
Какво представлява кометният анализ?
Кометният анализ, който също е известен като анализ с единична гел електрофореза, е проста и чувствителна техника за откриване на увреждане на ДНК. Той измерва разкъсванията на ДНК в еукариотните клетки и е стандартна техника за биомониторинг и тестване за генотоксичност.
Кометният анализ участва в капсулирането на клетки в агарозни суспензии с ниска точка на топене, лизиране на клетки в неутрални или алкални условия и електрофореза на суспендирани лизирани клетки. По време на процеса на капсулиране, клетките се суспендират в разтопена агароза с ниска точка на топене и агарозата образува матрица от въглехидратни влакна, за да ги закотви на място. Агарозата е осмотично неутрална; следователно позволява на разтворите да проникнат през гела и да повлияят на клетките, без да ги нарушават и разместват. Разтворът за лизис е силно концентриран воден разтвор на сол и детергент. Тази сол разрушава протеините и моделите на свързване в клетката, като същевременно нарушава съдържанието на РНК в клетката. Клетките се разрушават и всички протеини, РНК, цитоплазмени и нуклеоплазмени съставки се разрушават и дифундират в агарозната матрица, напускайки ДНК.
Фигура 02: Анализ на комета
Разтворът за електрофореза е алкален разтвор, при който двойната спирала на ДНК денатурира и нуклеоидът става едноверижен. По време на този процес се прилага електрическо поле за анализ на изображенията. Анализът на изображението измерва общия интензитет на флуоресценцията на ДНК и нуклеоида и ги сравнява. Цялостната структура наподобява комета с кръгла глава, съответстваща на останалата неувредена ДНК, и опашка за увредената ДНК. Колкото по-ярка и по-дълга е опашката поради по-силните сигнали, толкова по-високо е нивото на щетите.
Какви са приликите между микронуклеусния и кометния анализ?
- Микронуклеусът и кометният анализ са икономични, по-бързи, удобни и изискват по-малко умения.
- Извършват се главно върху ДНК.
- И двата анализа помагат при оценката на мутации и хромозомни аномалии.
- Освен това и двете техники използват химикали за извършване на процедурата.
Каква е разликата между микроядрения и кометния анализ?
Микроядреният анализ е важен за проверка на хромозомни увреждания като следствие от излагане на мутаген, докато кометният анализ е важен за откриване на първично увреждане на ДНК в отделни клетки. По този начин това е ключовата разлика между микроядрения и кометния анализ. Също така, микронуклеарният анализ е добре установен за откриване на кластогенност и анеугенност. Кометният анализ се използва като тест за генотоксичност за откриване на първично увреждане на ДНК в клетките. Освен това, микроядреният анализ предоставя информация за стабилността на химикалите, докато кометният анализ е едноклетъчна гел електрофореза.
Инфографиката по-долу представя разликите между микроядрения и кометния анализ в таблична форма за сравнение едно до друго.
Резюме – Анализ на микронуклеус срещу комета
Тестовете за генотоксичност помагат да се оценят възможностите за мутации и хромозомни аномалии. Микронуклеарният анализ и кометният анализ са две техники при анализите за генотоксичност. Микронуклеарният анализ оценява хромозомните увреждания като последица от излагане на мутаген. Кометният анализ е проста и чувствителна техника за откриване на увреждане на ДНК. И така, това е ключовата разлика между микроядрения и кометния анализ. Микронуклеарният анализ е важен при скрининга за химикали, които причиняват образуване на вретено и микроядра. Кометният анализ участва в капсулирането на клетки в агарозни суспензии с ниска точка на топене, лизиране на клетки в неутрални или алкални условия и електрофореза на суспендирани лизирани клетки.
