Ключовата разлика между директната и индиректната имунофлуоресценция е, че директната имунофлуоресценция използва едно антитяло, което работи срещу целта, която представлява интерес, докато индиректната имунофлуоресценция използва две антитела, за да маркира целта, която представлява интерес.
Имунофлуоресценцията или клетъчното изобразяване е техника, която се използва за маркиране на специфичен целеви антиген с флуорофор. Тук флуорофорът е флуоресцентно химическо съединение, което може да излъчва отново светлина при светлинно възбуждане. Когато флуорофорът се свърже с целевия антиген, той позволява откриването на целевата молекула в пробата. За да го опишем по-нататък, когато антигенът се свърже със специфично антитяло, той може да бъде конюгиран с флуорофори. Следователно е лесно да се открие наличието на целевия антиген в пробата, когато се наблюдава под флуоресцентен микроскоп.
Освен това има два вида имунофлуоресценция; директна и индиректна имунофлуоресценция. Разликата между директната и непряката имунофлуоресценция се състои главно в броя на използваните антитела и флуорофорната конюгация. Това означава, че при директна имунофлуоресценция флуорофорът директно се конюгира с първичното антитяло, докато при индиректната имунофлуоресценция флуорофорът се конюгира с вторичното антитяло.
Какво е директна имунофлуоресценция?
Имунофлуоресценцията използва антитела за откриване на специфични целеви антигени. Директната имунофлуоресценция е един от двата вида имунофлуоресценция. При директна имунофлуоресценция едно антитяло (първично антитяло) включва и флуорофорът директно се конюгира с първичното антитяло. При свързване на антитялото с целевия антиген, флуорофорът излъчва флуоресценция, която може да бъде открита от флуоресцентен микроскоп.
Фигура 01: Директна имунофлуоресценция
Въпреки това, директната имунофлуоресценция е скъп метод, тъй като първичните конюгирани антитела са скъпи в сравнение с вторичните антитела. Въпреки това, това не включва допълнителна стъпка, следователно, по-кратка техника. Освен това, неспецифичните свързвания са намалени при директна имунофлуоресценция. Следователно кръстосаната реактивност на видовете е ниска. Но при откриване чувствителността на директната имунофлуоресценция е слаба в сравнение с индиректната имунофлуоресценция.
Какво е индиректна имунофлуоресценция?
Индиректната имунофлуоресценция е вторият тип имунофлуоресценция, която включва два вида антитела като първични и вторични антитела при маркирането на целевия антиген. При този метод флуорофорът се конюгира с вторичното антитяло. Следователно тази техника включва допълнителна стъпка.
Фигура 02: Имунофлуоресценция
Въпреки това, чувствителността е висока при този метод, тъй като няколко флуорофора могат да бъдат конюгирани с вторични антитела и това прави откриването по-лесно. Освен това индиректната имунофлуоресценция е по-евтина поради факта, че конюгирането на вторични антитела е по-евтино и по-лесно. В сравнение с директната имунофлуоресценция, видовата кръстосана реактивност е висока при индиректния метод.
Какви са приликите между директната и индиректната имунофлуоресценция?
- Те са два вида имунофлуоресцентна техника.
- Първичните антитела и флуорофорът включват и двата метода.
- Освен това реакцията антиген-антитяло възниква и при двата метода.
- Освен това, както директната, така и непряката имунофлуоресценция използват флуоресцентен микроскоп за откриване на антиген.
Каква е разликата между директната и индиректната имунофлуоресценция?
Имунофлуоресценцията може да бъде директна или индиректна въз основа на конюгацията на флуорофора с използваните антитела. При директна имунофлуоресценция флуорофорът се конюгира с първичното антитяло, което е единственото антитяло, което участва в тази техника. За разлика от това, при индиректна имунофлуоресценция, флуорофорът се конюгира с вторичното антитяло, което е един от двата типа антитела, които участват в техниката. Следователно, основната разлика между директната и непряката имунофлуоресценция е типът антитяло, което се конюгира с флуорофора.
Следната инфографика предоставя едно до друго сравнение на разликата между директна и непряка имунофлуоресценция.
Обобщение – Директна срещу индиректна имунофлуоресценция
Имунофлуоресценцията е техника, която се използва за откриване на наличието на специфични антигени в проба. Тази техника използва специфични антитела. Следователно при това антителата се конюгират с флуорофори, за да ги открият с помощта на флуоресцентен микроскоп. Освен това има два вида имунофлуоресценция, а именно директна и непряка имунофлуоресценция. Директната имунофлуоресценция включва едно антитяло и флуорофор, директно конюгиран с това антитяло. Индиректната имунофлуоресценция включва две антитела; първичен и вторичен и флуорофор, конюгиран към вторичното антитяло. Тъй като няколко вторични антитела могат да се свържат с първично антитяло и няколко флуорофора могат да се конюгират с вторични антитела, индиректната имунофлуоресценция е по-чувствителен метод от директния метод. Освен това индиректният метод е по-евтин от директния. По този начин, това е разликата между директна и непряка имунофлуоресценция.
