Ключовата разлика между гел филтрация и афинитетна хроматография е, че гел филтрационната хроматография зависи от разликите в молекулното тегло или размера на пробата на аналита, докато афинитетната хроматография зависи от афинитета на аналита към имобилизиран лиганд.
Терминът хроматография в аналитичната химия се отнася до процеса на разделяне на компоненти в смес с помощта на различни техники. Хроматографията е сборно наименование, което представлява различен брой различни методи за разделяне.
Какво е гел филтрационна хроматография?
Гелфилтрационната хроматография е аналитична техника, при която разделянето на компонентите зависи от разликата в молекулното тегло или размер. Тази техника е известна също като хроматография с изключване на размера или молекулярно-ситова хроматография. Техниката на разделяне в този процес зависи от различната способност на молекулите в пробата да навлизат в порите на средата за гел-филтрация.
В техниката на гел филтриране неподвижната фаза съдържа перли от хидратиран, подобен на гъба материал, имащ пори с молекулярни размери, съдържащи тесен диапазон от размери. Ако прекараме воден разтвор, състоящ се от молекули с различни размери през колона, съдържаща тези „молекулярни сита“, молекулите, които са по-големи от порите на филтриращата среда, се движат бързо през колоната. Обратно, по-малките молекули влизат в порите на гела и са склонни да се движат бавно през колоната. Молекулите се елуират от колоната в ред на намаляване на размера на молекулите. Тук ограничението за изключване на гела е молекулната маса на най-малките молекули, които не могат да проникнат през порите на даден гел.
Има различни видове техники за гел филтриране, като индиректен метод на гел филтриране, гел филтрация в стационарно състояние, диализа с гел перли и т.н. Индиректната гел филтрационна хроматография е полезна при определянето на свободни хормони на щитовидната жлеза. Гел филтрационната хроматография в стационарно състояние е индиректна техника, полезна най-вече за измерване на свободни стероиди като кортизол, тестостерон и др. Диализата с гел перли, от друга страна, е модификация на гел филтрация в стационарно състояние, която е сравнително по-проста.
Какво е афинитетна хроматография?
Афинитетната хроматография е аналитична техника и метод на разделяне, който зависи от специфично свързващо взаимодействие между имобилизиран лиганд и неговия свързващ партньор. Някои примери включват свързване антитяло-антиген, свързване ензим-субстрат и свързване ензим-инхибитор. Следователно тази техника има много важни приложения при пречистване на нуклеинова киселина, пречистване на протеини от клетъчни екстракти и пречистване от кръв.
В тази техника най-важното свойство е имобилизацията на лиганда. Можем да използваме различни материали като акрилати и силикагел за това. Важно е да се предотврати пространствена интерференция на целевата молекула с лиганда. Освен това към твърдата фаза е прикрепен инхибитор. Ние наричаме този инхибитор спейсер. Класически спейсерът се състои от въглеводородна верига.
Стационарната фаза на афинитетната хроматография съдържа ядрото, спейсера и лиганда. Понякога има и метален йон, който е свързан с лиганда. Най-предпочитаната твърда фаза за стационарната фаза в тази техника е агарозният гел, тъй като той лесно се разпределя, за да запълни и опакова колоната със слоеве от смола от всякакъв размер, и е достатъчно голям, за да могат биомолекулите да текат свободно в и през перлите. Лигандите могат ковалентно да се прикрепят към гранулирания полимер по различни начини. Най-често срещаните спейсър съединения са цианоген бромид, епоксид, епоксид с C6 киселина и диамин. От друга страна, лигандът, който можем да използваме, се различава в зависимост от целта, например антитяло-антиген, железни или алуминиеви йони-фосфопротеини, авидин-биотин, глутатион-GST, хелатор-His-маркирани протеини и др.
Каква е разликата между гел филтрация и афинитетна хроматография?
Хроматографията е важна аналитична техника. Гел филтрационната хроматография и афинитетната хроматография са два важни варианта на хроматографията. Ключовата разлика между гел филтрация и афинитетна хроматография е, че гел филтрационната хроматография зависи от разликите в молекулното тегло или размера на пробата на аналита, докато афинитетната хроматография зависи от афинитета на аналита към имобилизиран лиганд.
Обобщение – Гел филтрация срещу афинитетна хроматография
Има различни видове хроматографски техники според тяхното приложение и естеството на пробата от аналита. Гел филтрацията и афинитетната хроматография са два такива типа техники. Ключовата разлика между гел филтрация и афинитетна хроматография е, че гел филтрационната хроматография зависи от разликите в молекулното тегло или размера на пробата от аналита, докато афинитетната хроматография зависи от афинитета на аналита към имобилизиран лиганд.
