Ключова разлика – Подреждане на гел срещу разделяне на гел
Термините подреждащ гел и разделящ гел се използват при обяснение на техниката SDS-PAGE. SDS-PAGE или електрофореза с натриев додецилсулфат-полиакриламиден гел е лабораторна техника, която се използва за разделяне на протеинови молекули въз основа на техните молекулни тегла. Теорията зад техниката е, че протеините с различно молекулно тегло показват различни скорости на миграция; молекулите с ниско молекулно тегло мигрират по-бързо, докато молекулите с високо молекулно тегло мигрират бавно. Средата за миграция е гел. Има два вида гелове, наречени гел за подреждане и гел за разделяне. Ключовата разлика между подреждащия гел и разделящия гел е, че pH на подреждащия гел е 6,8, докато pH на разделящия гел е 8,8.
Какво е Stacking Gel?
Натрупващият гел е полиакриламиден гел с ниска концентрация, който се поставя върху по-концентриран разделящ гел (разделителен гел) в SDS-PAGE техника. Натрупващият гел се използва за подобряване на разделителната способност на електрофорезата. Разделителната способност се увеличава поради разликата между концентрациите на наслагващия гел и разделящия гел, които влияят върху протеините в пробата. Тъй като концентрацията на полиакриламид в подреждащия гел е ниска, размерът на порите е по-голям. Това също помага за увеличаване на разделянето.
Натрупващият гел е насипен полиакриламиден гел с големи пори от около 7% полиакриламид. Тези пори не действат като значителна бариера за големи протеинови молекули. Следователно този гел влияе леко върху мобилността на тези протеини. Това прави разделяне според подвижността и размера на протеина чрез концентрирането им между два гела.
Фигура 01: SDS-PAGE акриламиден гел
PH на гела за подреждане е 6,8. Неговото рН е киселинно от това на разтворимия гел с 2 рН единици. Това pH предполага по-ниска йонна сила, следователно по-високо електрическо съпротивление. Това провокира подвижността на протеините в сравнение с други заредени частици, присъстващи в гела.
Какво е разделителен гел?
Разделящият гел или разделящият гел на SDS-PAGE техника е силно концентриран полиакриламиден гел, който се поставя върху горната част на нискоконцентриран подреждащ гел. Разделителният гел съдържа голямо количество полиакриламид (10%). pH на този гел се поддържа като pH=8,8, което е по-високо ниво на pH от това на гела за подреждане.
Фигура 02: Апарат за гел електрофореза
Когато протеиновите молекули достигнат до разделящия гел, миграцията на тези молекули се забавя, тъй като разделящият гел е гел с висока концентрация и малък размер на порите, който може да действа като значителна бариера за движението на протеиновите молекули. Това забавяне позволява на другите протеини да мигрират бавно, за да ги наваксат, което води до тясна, концентрирана лента между двата гела.
Каква е връзката между подреждащия гел и разделящия гел?
И двата типа гел за подреждане и разделителен гел се използват в един и същ апарат
Каква е разликата между гел за подреждане и гел за разделяне?
Натрупващ гел срещу разделящ гел |
|
| Натрупващият гел е полиакриламиден гел с ниска концентрация, който се поставя върху по-концентриран разделящ гел (разделителен гел) в SDS-PAGE техника. | Разделящият гел или разделящият гел при SDS-PAGE техника е силно концентриран полиакриламиден гел, който се поставя върху ниска концентрация на наслагващ гел. |
| Разположение | |
| Натрупващият гел се поставя върху разделящия (разделящ) гел. | Разделителният гел се поставя на дъното на контейнера, използван за гел електрофореза. |
| Концентрация | |
| Концентрацията на стекинг гела е висока. | Концентрацията на разделящия гел е ниска. |
| Съдържание на полиакриламид | |
| Гелът за подреждане съдържа около 7% полиакриламид. | Разделителният гел съдържа около 10% полиакриламид. |
| pH | |
| PH на подреждащия гел е 6,8. | PH на разделителния гел е 8,8. |
| Размер на порите | |
| Големи размери на порите присъстват в подреждащия гел. | В разделящия гел има пори с малък размер. |
| Резолюция | |
| Гелът за подреждане дава по-добра разделителна способност. | Отделящият гел дава лоша резолюция. |
Обобщение – Подреждане на гел срещу разделяне на гел
Натрупващият гел и разделящият гел са два вида полиакриламидни гелове, използвани за по-добро разделяне на протеиновите молекули в дадена проба. Разликата между подреждащия гел и разделящия гел е, че pH на подреждащия гел е 6,8, докато pH на разделящия гел е 8,8.
