Ключова разлика – SDS страница срещу Western Blot
Western blotting е техника, която открива специфичен протеин от протеинова проба. Тази техника се извършва чрез няколко ключови стъпки: гел електрофореза, блотиране и хибридизация. Електрофореза с натриев додецилсулфат и полиакриламиден гел (SDS Page) е вид техника за гел електрофореза, която се използва за разделяне на протеини според техните размери (молекулни тегла). Western blot е специален лист от блотинг мембрана, който се използва за прехвърляне на същия модел на протеините в SDS страницата. Ключовата разлика между SDS Page и Western blot е, че SDS Page позволява разделянето на протеини в смес, докато Western blot позволява откриване и количествено определяне на специфичен протеин от смес. И двете са полезни при изследвания за анализ на протеини.
Какво е SDS страница?
SDS Page е техника за гел електрофореза, използвана за разделяне на протеини. Обикновено се използва в биохимията, генетиката, криминалистиката и молекулярната биология. След като протеините са извлечени от пробата, те се пускат върху гел, съставен от SDS и полиакриламид. SDS е анионен детергент, който се използва за линеаризиране на протеини (денатуриране на протеини) и за придаване на отрицателен заряд на линеаризираните протеини, пропорционален на тяхната молекулна маса. Полиакриламидът става твърдата опора за гела. Денатурираните протеини, които са отрицателно заредени, мигрират към положителния край на апарата през гела. Според размерите на протеините скоростите на миграция се различават между протеините и се получава разделяне. Следователно страницата SDS е полезна за разделянето на отделни протеини въз основа на техните размери.
Приготвянето на полиакриламиден гел за фракциониране на протеини е решаваща стъпка в SDS Page. Правилната концентрация на полиакриламид и вида на използвания омрежващ агент оказват силно влияние върху физичните свойства на гела, което прави действителното разделяне на различните протеини. Размерът на порите на гела трябва да се управлява правилно за ефективно разделяне. SDS Page обаче се счита за техника за разделяне на протеини с висока разделителна способност.
Техниката SDS Page има голямо ограничение при анализа на протеини. Тъй като SDS денатурира протеините преди разделянето, той не позволява откриването на ензимна активност, протеинови свързващи взаимодействия, протеинови кофактори и др.
Фигура 01: Страница SDS
Какво е Western Blot?
Техниката Western blotting позволява откриването на специфичен протеин от протеинова смес и измерване на количеството и молекулното тегло на протеина. Western blot е мембраната, използвана по време на процедурата за блотинг, за да се получи огледален образ на протеиновите модели в SDS-полиакриламидния гел. Мембраната, която се използва за Western blotting, е съставена предимно от нитроцелулоза или поливинилиден дифлуорид (PVDF). Мембраната с прехвърления протеин може да се използва за идентифициране на желания протеин. Изисква се висококачествено антитяло за откриване на желания протеин чрез хибридизация. Антитялото се свързва със своя специфичен антиген и разкрива наличието на желания антиген, който е протеин.
Прехвърлянето на протеините от SDS полиакриламиден гел към Western blot се извършва чрез електроблотинг. Това е ефективен и бърз метод, който кара протеините да излизат от гела чрез електрофореза и да преминават върху нитроцелулозната мембрана (уестърн блот).
Фигура 02: Western Blot
Каква е разликата между SDS Page и Western Blot?
SDS страница срещу Western Blot |
|
| SDS Page е техника за гел електрофореза. | Western blot е техника, която се извършва върху мембрана за откриване на специфичен протеин от смес. |
| Използване | |
| Страницата SDS позволява разделяне на протеини според техните размери. | Western blot позволява прехвърлянето на протеини върху SDS гела, без да променя модела му и позволява хибридизация със специфични антитела. |
| Недостатъци | |
| Денатурацията на протеини, високата цена и наличието на химикали невротоксини са недостатъците на тази техника. | Тази техника отнема време и изисква добър личен опит и специфични контролирани условия. |
Резюме – страница SDS срещу Western Blot
SDS страница и Western blot са два метода, включени в протеиновия анализ. SDS Page позволява лесно разделяне на протеини върху гел според тяхното молекулно тегло. Western blot помага да се потвърди наличието и количеството на специфичен протеин чрез хибридизация със специфични антитела. Това е разликата между SDS Page и Western blot.
