Ключова разлика – оцветяване по грам срещу киселинно бързо
Бактериите са много малки микроорганизми. Те са прозрачни и откриването им е трудно при живи и неопетнени условия. По този начин са разработени различни методи за оцветяване, за да се улесни откриването на бактерии. Има три основни типа техники за оцветяване: просто оцветяване, диференциално оцветяване и структурно оцветяване. Диференциалното оцветяване е техника, която използва повече от едно оцветяване за разграничаване на бактерии. Оцветяването по Грам и киселинно устойчивото оцветяване са най-популярни като диференциални оцветявания. Оцветяването по Грам е диференциална техника на оцветяване, която разделя бактериите на две групи, известни като Грам-положителни бактерии и Грам-отрицателни бактерии. Киселинноустойчивото оцветяване е диференциално оцветяване, използвано за идентифициране на киселинно устойчиви организми като Mycobacterium от некиселинно устойчиви организми. Това е основната разлика между оцветяването по Грам и киселинно устойчивото оцветяване.
Какво е оцветяване по Грам?
Оцветяването по Грам е важна техника за диференциално оцветяване, използвана за идентифициране на бактерии в микробиологията. Тази техника е въведена от датския бактериолог Ханс Кристиан Грам през 1884 г. Оцветяването по Грам категоризира бактериите в две основни групи, наречени грам положителни и грам отрицателни, които са много важни при класификацията и идентификацията на бактериите. Микробиолозите извършват оцветяване по грам като начална стъпка в характеризирането на бактериите по време на своите изследвания.
Бактериите са групирани въз основа на разликите в клетъчната им стена. Грам положителните бактерии се състоят от дебел пептидогликанов слой в клетъчната си стена, докато грам отрицателните бактерии се състоят от тънък пептидогликанов слой в клетъчната им стена. Резултатът от оцветяването по грам ще се основава на разликата в дебелината на пептидогликановия слой на клетъчната стена.
Оцветяването по грам се извършва с помощта на четири различни реагента, а именно; първично оцветяване, оцветител, обезцветяващ агент и контра оцветяване. Кристално виолетово и сафранин се използват съответно като основно и контра оцветяване, докато грам йод и 95% алкохол се използват съответно като оцветител и обезцветител. Основните стъпки на оцветяването в грамове са както следва;
- Бактериална намазка се приготвя върху чисто предметно стъкло, топлинно се фиксира и охлажда.
- Намазката се залива с кристално виолетово за 1 – 2 минути.
- Намазката се изплаква с бавно течаща чешмяна вода, за да се отстранят излишните петна.
- Grams йод се нанася върху цитонамазката за 1 минута.
- Намазката се изплаква с бавно течаща чешмяна вода
- Намазката се измива с 95% алкохол за 2 – 5 секунди и се изплаква с бавно течаща чешмяна вода.
- Натривката се оцветява насрещно със сафранин за 1 минута
- Намазката се изплаква с бавно течаща чешмяна вода, изсушава се и се наблюдава под микроскоп.
В края на оцветяването по грам грам отрицателните бактерии ще се наблюдават в розов цвят, докато грам положителните бактерии ще се наблюдават в лилав цвят.
Фигура 01: Грам отрицателни и грам положителни бактерии
Резултатът от оцветяването по грам се определя от дебелината на пептидогликановия слой в клетъчната им стена. По време на етапа на обезцветяване, първичното оцветяване и оцветителят лесно се отстраняват от грам-отрицателните бактерии и стават безцветни, тъй като имат тънък слой пептидогликан. Първичното оцветяване се запазва в грам-положителните бактерии, тъй като те имат дебел пептидогликанов слой. Противооцветяването няма да е ефективно за грам положителни бактерии поради задържането на първичното оцветяване. По този начин грам положителните бактерии ще бъдат видими в основния цвят на петна, тоест лилав цвят. Насрещното оцветяване ще оцвети грам-отрицателните бактерии и те ще бъдат видими в избрания цвят, който е цветът на сафранин. Следователно е лесно да се категоризират бактериите в две групи чрез оцветяване по грам и е ценно при бактериалната диференциация и идентификация.
Какво е Acid Fast?
Киселинноустойчивостта е физическо свойство на определени бактерии, по-специално тяхната устойчивост на обезцветяване от киселини по време на процедури за оцветяване. Веднъж оцветени, тези организми издържат на процедурите за обезцветяване на основата на разредена киселина и/или етанол, често срещани в много протоколи за оцветяване. По този начин на тези организми е дадено името „киселинно бързи“. Това свойство се проявява поради наличието на високо ниво на восъчен материал (миколови киселини) в техните клетъчни стени. Този тест е критичен за идентифицирането на Mycobacterium tuberculosis.
Фигура 2: Киселинноустойчиви микобактерии
Това киселинно устойчиво оцветяване е разработено от Paul Ehrlich през 1882 г. Киселинно устойчивата техника на Ehrlich е модифицирана от Ziehl-Neelsen и сега се използва по-често. Процедурата за киселинно бързо оцветяване включва три различни реагента. Като основно оцветяване се използва Carbol fuschin. Киселинният алкохол се използва като обезцветяващ агент. Метиленовото синьо се използва като контра оцветител. Процедурата за оцветяване се извършва, както следва.
- Първичното оцветяване (карбол фуксин) се прилага върху фиксираната проба върху предметното стъкло (Всички клетки ще бъдат оцветени в червен цвят).
- Предметното стъкло се нагрява чрез пара за 5 минути, което вкарва петната в клетките правилно.
- След това се добавя обезцветяващият разтвор (това премахва червеното багрило от всички клетки, с изключение на устойчивите на киселина бактерии).
- Добавя се метиленово синьо като противооцветяване (оцветява всички обезцветени бактериални клетки).
- Киселинноустойчивите бактерии остават червени, докато некиселиноустойчивите бактерии се оцветяват в синьо.
Какви са приликите между оцветяването по Грам и Acid Fast?
- Оцветяването по Грам и Acid fast са две различни техники на оцветяване.
- И двете техники категоризират бактериите в две групи.
- И двете техники използват две петна и едно обезцветяване.
Каква е разликата между оцветяването по Грам и Acid Fast?
Оцветяване по Грам срещу киселинно бързо |
|
| Оцветяването по Грам е диференциална техника на оцветяване, която разделя бактериите на две групи Грам-положителни бактерии и Грам-отрицателни бактерии. | Киселинноустойчивото оцветяване е диференциално оцветяване, използвано за идентифициране на киселинноустойчиви организми от некиселинноустойчиви организми. |
| Първично петно | |
| Кристално виолетовото е често използваното основно оцветяване при оцветяване по грам. | Carbol fuchsin е основното оцветяване, използвано в киселинното бързо. |
| Обезцветяващ агент | |
| 95% алкохол се използва като обезцветяващ агент при оцветяване по грам. | Алкохолът с киселина се използва като обезцветяващ агент в киселините. |
| Counter Stain | |
| Оцветяването по Грам използва сафранин като контра оцветяване. | Устойчивото на киселини оцветяване използва метиленово синьо като контра оцветяване. |
| Наблюдение | |
| Грам отрицателните бактерии се наблюдават в избран цвят, а грам положителните бактерии се наблюдават в лилав цвят. | Киселинноустойчивите бактерии се наблюдават в червен цвят, а некиселинноустойчивите бактерии се наблюдават в син цвят. |
Обобщение – Оцветяване по Грам срещу киселинно бързо действие
Визуализацията на микроорганизмите в живо състояние е трудна. Следователно, биологичните петна и процедурите за оцветяване се използват широко за изследване на техните свойства. Диференциалното оцветяване е един вид техника на оцветяване, използвана за диференциране на бактерии. Оцветяването по Грам и киселинно устойчивото оцветяване са две различни техники на оцветяване. Оцветяването по Грам разграничава грам отрицателните бактерии от грам положителните бактерии въз основа на дебелината на техните клетъчни стени. Киселинно устойчивото оцветяване разграничава киселинно устойчивите бактерии от не киселинно устойчивите бактерии въз основа на съдържанието на миколова киселина в клетъчната стена. Това е разликата между киселинно устойчиво и оцветяване по грам.
Изтеглете PDF версия на Gram Stain vs Acid Fast
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката за цитиране. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между оцветяване по Грам и киселинно бързо.
