Ключовата разлика между хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране е, че хроматофокусирането е вид метод на колонна хроматография, който използва йонообменни смоли, докато изоелектричното фокусиране е вид техника на електрофореза, която използва имобилизирани pH градиентни гелове.
Хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране са две техники, които разделят протеините според техните изоелектрични точки. Както хроматофокусирането, така и изоелектричното фокусиране имат голяма разделителна способност. Хроматофокусирането е метод за колонна хроматография с висока разделителна способност, докато изоелектричното фокусиране е метод за електрофоретично разделяне. Освен това хроматофокусирането не използва електрическо поле, докато изоелектричното фокусиране се нуждае от електрическо поле.
Какво е хроматофокусиране?
Хроматофокусирането е вид хроматография с високо елуиране, която разделя протеините според разликите в тяхната изоелектрична точка. Той използва колона с йонообменна смола и вътрешно развит pH градиент. За разлика от изоелектричното фокусиране, хроматофокусирането не включва електрическо поле. Хроматофокусирането е мощна техника за пречистване, която може да раздели силно сходни молекули, дори различаващи се само с 0,02 pH единици. Следователно хроматофокусирането е най-подходящо като крайна стъпка на полиране, когато се изисква висока разделителна способност при разделянето на много подобни компоненти.
При хроматофокусиране пробата се нанася върху колоната чрез смесването й със стартовия буфер. Протеините, които са с pH над тяхната изоелектрична точка, са отрицателно заредени и остават близо до горната част на колоната, докато други протеини, които са с pH под тяхната изоелектрична точка, мигрират надолу по колоната. Протеинът с най-висока изоелектрична точка се елуира първи, докато протеинът с най-ниска изоелектрична точка се елуира последен от колоната. Тази техника се влияе от няколко фактора, като утаяване на протеини и линейност на рН градиента.
Какво е изоелектрично фокусиране?
Изоелектричното фокусиране е техника, която разделя различни молекули въз основа на тяхната изоелектрична точка. Известно е още като електрофокусиране. Тази техника често се използва за разделяне на протеини в гел. При изоелектрично фокусиране пробата се добавя към имобилизирани pH градиентни (IPG) гелове. IPG гелът е матрица от акриламиден гел, съполимеризирана с градиент на pH. Протеините мигрират към катода, докато намерят pH областта на своите изоелектрични точки. Когато протеинът достигне рН, което няма нетен заряд, миграцията спира и дава стационарна лента. По същия начин, всеки протеин дава ивица в точка от рН градиента, съответстваща на неговата изоелектрична точка.
Фигура 01: Изоелектрично фокусиране
Изоелектричното фокусиране е първата стъпка на двуизмерната гел електрофореза. При тази техника протеините първо се разделят според техните изоелектрични точки чрез изоелектрично фокусиране и след това се разделят по тяхното молекулно тегло чрез SDS-PAGE.
Какви са приликите между хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране?
- Хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране са два метода с висока разделителна способност.
- И двете се базират на изоелектричната точка на протеините.
- Тези техники използват градиент на pH.
- И двете процедури са информативни за характеризиране на варианти на човешки хемоглобин.
- Могат да разделят молекули, при които стойностите на pI се различават само с 0,02 pH единици.
Каква е разликата между хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране?
Хроматофокусирането е техника за колонна хроматография с висока разделителна способност, която разделя протеините според тяхната изоелектрична точка. Обратно, изоелектричното фокусиране е електрофоретична техника, която разделя протеините според тяхната изоелектрична точка чрез прилагане на електрическо поле по градиент на pH, образуван в капиляр. И така, това е ключовата разлика между хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране.
Друга разлика между хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране е, че хроматофокусирането не включва електрическо поле, докато изоелектричното фокусиране се нуждае от електрическо поле.
Обобщение – Хроматофокусиране срещу изоелектрично фокусиране
Хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране са две сходни техники, които имат висока разделителна способност на молекули, особено много подобни молекули. Хроматофокусирането е техника на колонна хроматография с висока разделителна способност, докато изоелектричното фокусиране е метод на електрофореза. Хроматофокусирането не включва електрическо поле, за разлика от изоелектричното фокусиране. Така това обобщава разликата между хроматофокусирането и изоелектричното фокусиране.
