Ключовата разлика между градиент на захароза и ултрацентрофугиране с възглавничка на захароза е, че при ултрацентрофугиране с градиент на захароза се използва непрекъснат градиент на захароза, докато при ултрацентрофугиране с възглавница на захароза се използва прекъснат градиент на захароза.
Захарозен градиент и ултрацентрофугиране със захарозна възглавница са два подобни типа техники, използвани за разделяне на специфични типове макромолекули. И в двете техники се използва градиент на плътността на захарозата. Но при ултрацентрофугиране с градиент на захароза се използва непрекъснат градиент на плътност, докато при ултрацентрофугиране с възглавничка на захароза се използва прекъснат градиент на плътност.
Какво е градиентно ултрацентрофугиране на захароза?
Ултрацентрофугирането с градиент на захароза е техника, която може да се използва за фракциониране на макромолекули като ДНК, РНК и протеини. Има няколко стъпки в тази техника. Те са подготовка в градиент на захароза, центрофугиране, разделяне и елуиране. Подготовката на градиента е ключовата стъпка в тази техника. При тази техника пробата, съдържаща различни по размер макромолекули, се наслоява върху повърхността на колона с градиент на захароза. При центрофугиране различни по размер макромолекули се утаяват през градиентната колона на захарозата с различни скорости. Утаяването зависи от няколко фактора, включително силата на центрофугиране, формата на размера и плътността на макромолекулите, плътността и вискозитета на градиента. В края на центрофугирането макромолекулите се разделят пространствено по плътност. По-големите макромолекули (макромолекули с висока плътност) се утаяват към дъното. По-леките (макромолекули с ниска плътност) остават в горната част на градиента. Следователно молекулите се разделят като различни ленти. След това лентите трябва да се разделят и да се извърши пречистването на специфичната макромолекула от захарозата.
Фигура 01: Ултрацентрофугиране с градиент на захароза
От страна на приложението, този метод се използва широко за фракциониране на ДНК молекули. Ултрацентрофугирането с градиент на захароза обикновено се използва за характеризиране на размера и състава на протеиновия комплекс. Освен това тази техника се използва за частично пречистване на иРНК.
Какво е ултрацентрофугиране със захароза?
Ултрацентрофугирането със захарозна възглавница е друга техника, която позволява фракционирането на макромолекулите. За разлика от ултрацентрофугирането с градиент на плътност на захароза, ултрацентрофугирането с възглавница със захароза използва прекъснат градиент на плътност. Концентрацията на захароза се увеличава отгоре надолу на отделни стъпки. При тази техника разделянето се постига чрез поставяне на избистрения екстракт върху малък обем разтвор на захароза в центрофужна епруветка, така наречената захарозна възглавница. Това позволява по-добро разделяне при високоскоростно центрофугиране. Когато молекулите се отделят като лента между захарозната възглавница, бялата лента може да бъде събрана и пречистена. Освен това, примесите могат да бъдат допълнително отстранени с помощта на метода на захароза. Методът със захарозна възглавница позволява 60-70% от епруветката да бъде напълнена с пробата. Следователно методът със захарозна възглавница позволява обработката на по-голям обем проба.
Какви са приликите между захарозен градиент и ултрацентрофугиране със захарозна възглавница?
- Захарозният градиент и ултрацентрофугирането със захарозна възглавница са две техники, които се използват за разделяне на смес от макромолекули.
- И в двата метода се използва градиент на захароза.
- Центрифугирането е стъпка и в двата метода.
- Молекулите се утаяват като лента или зона при всеки метод.
Каква е разликата между градиент на захароза и ултрацентрофугиране със захарна възглавница?
Ултрацентрофугирането с градиент на захароза е техника, която използва непрекъснат градиент на захароза в центрофужната епруветка, докато ултрацентрофугирането с възглавничка на захароза е техника, която използва прекъснат градиент на захароза. По този начин, това е ключовата разлика между захарозен градиент и ултрацентрофугиране със захарозна възглавница.
Освен това ултрацентрофугирането със захарозна възглавница позволява да се обработи по-голям обем от пробата, докато ултрацентрофугирането с градиент на захарозата позволява да се обработи сравнително малък обем от пробата.
По-долу инфографиката представя в таблица повече разлики между захарозен градиент и ултрацентрофугиране със захарозна възглавница.
Обобщение – градиент на захароза срещу ултрацентрофугиране с възглавничка на захароза
Ултрацентрофугирането с градиент на захароза разделя макромолекулите с помощта на непрекъснат градиент на захароза. Обратно, ултрацентрофугирането със захарна възглавница използва прекъснат градиент на захароза, за да отдели специфичен тип частици в смес. И така, това е ключовата разлика между захарозен градиент и ултрацентрофугиране със захарозна възглавница. Методът със захарозна възглавница позволява събирането на морфологично непокътнати частици, тъй като не причинява механичен стрес, за разлика от градиентното ултрацентрофугиране на захароза, което раздробява молекулите до дъното на епруветката. Освен това, ултрацентрофугирането със захарозна възглавница позволява да се обработи по-голям обем от пробата, отколкото ултрацентрофугирането с градиент на захароза.
