Ключова разлика – хибридизация in situ срещу имунохистохимия
Диагностиката на рак и инфекциозни заболявания е популярна тенденция, при която се използват нови техники, базирани на протеомика и геномика, с цел идентифициране на тумори или инфекциозни клетки, тяхната пролиферация и местата на клетъчно развитие и анализиране на генетичната основа на повечето заразни и незаразни заболявания. Това ще доведе до точна обработка и проектиране на лекарства и до разработване на персонализирани терапии за заболявания. Хибридизацията in situ (ISH) и имунохистохимията (IHC) са две такива широко използвани техники в биологията на рака и ключовата разлика между хибридизацията in situ и имунохимията се крие в молекулите, които се използват в процедурата за анализ. При ISH сондите на нуклеинова киселина се използват при анализа, докато при IHC се използват моноклонални и поликлонални антитела за диагностични определяния.
Какво е хибридизация на място (ISH)?
In situ хибридизацията е техника за хибридизиране на нуклеинова киселина, която се извършва директно върху част или секция от тъкан, в цялата тъкан или в клетките. Техниката зависи от теорията на Watson Crick за комплементарно базово сдвояване, което води до ДНК-ДНК хибриди или ДНК-РНК хибриди, които могат да открият мутирали гени или да идентифицират необходимия ген, който представлява интерес. Едноверижни ДНК последователности, двойно-верижни ДНК последователности, едноверижни РНК последователности или синтетични олигонуклеотидни последователности се използват като сонди по време на техниката на хибридизация и тези сонди са белязани с радиоактивен фосфор в неговия 5' край за процедури за идентификация при авторадиография или маркирани с помощта на флуоресцентни багрила. Съществуват различни видове техники за ISH въз основа на вида на използваната сонда и вида на следваната техника за визуализация.
Фигура 01: Флуоресцентна in situ хибридизация
Има много приложения на ISH, главно в молекулярната диагностика на инфекциозни заболявания, за да се идентифицира наличието на патогени и да се потвърди патогенът чрез молекулярна диагностика. Използва се и в областта на биологията на развитието, кариотипирането и филогенетичния анализ и физическото картографиране на хромозомите.
Какво е имунохистохимия (IHC)?
При техниката на IHC, основната анализирана молекула е антигенът. По време на IHC се използват моноклонални и поликлонални антитела, за да се определи наличието на антигени при инфекция или статус на злокачествена клетъчна пролиферация. Техниката се основава на свързване антиген-антитяло и за тази техника се използват ензимни етикети; едно такова приложение е ELISA (ензимно свързан имуносорбентен анализ). Маркерите могат също да бъдат флуоресцентно маркирани антитела или радиомаркирани антитела.
Фигура 02: Имунохистохимия
IHC се използва широко за откриване на ракови клетки. Диагностичните процедури са насочени към антигените, присъстващи в туморните клетки, за идентифициране и характеризиране на тумора. Същата процедура е включена за диагностициране на инфекциозни агенти. Моноклоналните и поликлоналните антитела също се използват за анализиране на различни генни продукти чрез активиране на реакцията на свързване антитяло-антиген между желания протеин и приложеното синтетично антитяло.
Какви са приликите между хибридизацията in situ и имунохистохимията?
- ISH и IHC са силно специфични реакции.
- И двете техники са много точни.
- И двете техники могат да се използват при диагностика на рак и инфекциозни заболявания.
- Тези техники се изпълняват в стерилна ин витро среда.
- И двете са бързи техники, които осигуряват възпроизводими резултати.
- ISH и IHC използват методи за откриване като радиомаркиране и флуоресцентни техники.
Каква е разликата между хибридизацията in situ и имунохистохимията?
In situ хибридизация срещу имунохистохимия |
|
| ISH е техника за хибридизиране на нуклеинова киселина, която се извършва директно върху част или секция от тъкан или върху цялата тъкан. | IHC е техника, при която се използват моноклонални и поликлонални антитела за определяне на наличието на антигени, които са специални протеинови маркери, поставени върху клетъчните повърхности. |
| Тип на анализираните биомолекули | |
| ISH анализира нуклеинови киселини. | IHC анализира протеини-антигени. |
| Основи на биохимичната реакция | |
| При тази техника се получава комплементарно базово сдвояване между ДНК-ДНК или ДНК-РНК. | Взаимодействията антиген-антитяло участват в имунохистохимията. |
| Методи за откриване, свързани с ензим | |
| Методите за откриване, свързани с ензими, не могат да се използват в ISH. | Методи за откриване, свързани с ензими, могат да се използват в IHC. |
Резюме – хибридизация in situ срещу имунохистохимия
Молекулярната диагностика са бързи и потвърдителни методи, които могат да се използват за идентифициране на незаразно заболяване като рак или заразно заболяване като ХИВ или туберкулоза въз основа на молекулярните маркери, присъстващи в клетките, които водят до проявата на заболяването. Молекулярните маркери могат да присъстват под формата на експресирани протеини или на генетично ниво, на базата на които се въвеждат различни нови техники за повишаване на ефективността и са по-малко трудоемки, въпреки че има висока цена, свързана с тези техники. Така ISH зависи от ДНК-ДНК или ДНК-РНК хибридно образуване, а IHC зависи от специфичните реакции между антитяло и антиген. Това е разликата между in situ хибридизацията.
Изтеглете PDF версия на In situ хибридизация срещу имунохистохимия
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката за цитиране. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между хибридизация in situ и имунохистохимия.
