Ключовата разлика между ник транслацията и крайното запълване е, че ник транслацията е процес, който създава белязани ДНК сонди за различни реакции на хибридизация, докато крайното запълване е техника, която създава затъпени фрагменти чрез добавяне на нуклеотиди в едноверижни надвеси.
Преводът на ник и запълването на края са две техники, използвани в молекулярната биология. Nick транслацията се използва за маркиране на проби за хибридизация, за да се открият специфични нуклеотидни последователности. Крайният пълнеж се използва за направата на затъпени фрагменти, които имат лепкави краища с еднонишкови надвеси. И двете техники са от голямо значение и се извършват рутинно в лаборатории за молекулярни изследвания.
Какво е Nick Translation?
Преводът на Ник е важна техника, използвана за приготвяне на белязани сонди за различни молекулярно-биологични техники като блотинг, in situ хибридизация, флуоресцентна in situ хибридизация и т.н. Това е in vitro метод за маркиране на ДНК. ДНК сондите се използват за идентифициране на специфични ДНК или РНК последователности. С помощта на белязана сонда специфични фрагменти могат да бъдат маркирани или визуализирани от сложна смес от нуклеинова киселина. Следователно белязаните сонди се приготвят с помощта на различни техники. Преводът на Ник е един такъв метод, който произвежда белязани сонди с помощта на ензими ДНКаза 1 и ДНК полимераза 1.
Фигура 01: Превод на Ник
Процесът на транслация на Ник започва с ензимна активност DNase 1. DNase 1 въвежда цепнатини във фосфатния скелет на двойноверижна ДНК чрез разцепване на фосфодиестерните връзки между нуклеотидите. След като никът бъде създаден, ще се произведе свободна 3′ ОН група на нуклеотида и ензимът ДНК полимераза 1 ще действа върху нея. 5' до 3' екзонуклеазната активност на ДНК полимераза 1 премахва нуклеотидите от ник в посока 3' на ДНК веригата.
В същото време полимеразната активност на ензима ДНК полимераза 1 работи и добавя нуклеотиди, за да замени отстранените нуклеотиди. Ако нуклеотидите са белязани, заместването ще се извърши от белязаните нуклеотиди и ще маркира ДНК за идентификация. И накрая, тази новосинтезирана белязана ДНК може да се използва като сонди в различни реакции на хибридизация.
Какво е крайно пълнене?
Крайното запълване е техника, използвана в молекулярната биология за създаване на затъпени фрагменти. Рестрикционното смилане произвежда фрагменти с надвеси. Тези фрагменти може да не са съвместими за лигиране в плазмидни вектори. Векторите често са притъпени, за да позволят свързването на несъвместими краища. Следователно, фрагменти с надвеси могат да бъдат притъпени чрез добавяне на нуклеотидите към комплементарната верига, използвайки надвеса като шаблон за полимеризация. Този процес е известен като крайно запълване.
ДНК полимеразите като фрагмент на Кленов от ДНК полимераза I и Т4 ДНК полимераза катализират крайното запълване. Те добавят нуклеотиди за запълване (5′ → 3′) и дъвчат обратно (3′ → 5′). След като лепкавите краища се запълнят, те стават тъпи и са готови за лигиране във вектор.
Освен това запълването на краищата може да се използва за етикетиране на ДНК молекули. Въпреки това, той може да се използва само за маркиране на ДНК молекули с лепкави краища. В сравнение с превода на псевдоним, запълването на края е по-щадящ метод, който рядко причинява прекъсвания на ДНК.
Какви са приликите между превода на Nick и крайното попълване?
- Както преводът на псевдоним, така и запълването на края са молекулярно-биологични техники.
- Могат да се използват за етикетиране на сонди.
- И двете са ин витро
Каква е разликата между превода на Nick и крайното попълване?
Преводът на Ник е техника, която създава белязани проби за хибридизация. За разлика от това, крайното запълване е техника, която създава тъпи фрагменти за лигиране във вектори. И така, това е ключовата разлика между превода на ник и попълването на края. Освен това преводът на Nick изисква използването на 5'към 3' екзонуклеазна активност, докато крайното запълване не изисква 5'към 3' екзонуклеазна активност.
Инфографиката по-долу представя по-подробно разликите между превода на псевдонима и попълването на края.
Резюме – Превод на псевдоним срещу крайно попълване
Преводът на Ник е метод, който включва радиомаркирани нуклеотиди в ДНК. Той синтезира белязани сонди въз основа на активността на ДНКаза 1 и ензимите ДНК полимераза 1 на Е. coli. Запълването на края, от друга страна, е техника, която произвежда тъпи фрагменти. Когато фрагментите имат лепкави краища (едноверижни надвеси), е необходимо те да бъдат затъпени, за да се лигират във вектори. Крайното запълване добавя съвместими нуклеотиди и създава фрагменти с тъпи краища, за да ги направи съвместими за лигиране. По този начин това обобщава разликата между превода на прякора и попълването на края.
