Ключовата разлика между BL21 и DH5 Alpha е, че BL21 е генетично проектирана компетентна клетка на E. coli с дефицит на протеаза, използвана основно за експресия на протеини, докато DH5 Alpha е генетично проектирана компетентна клетка на E. coli с recA1 мутация, използвана основно за плазмидна трансформация.
E. coli е един от известните организми на избор за производство на рекомбинантен протеин. Тя се превърна в най-популярната платформа за изразяване през годините. Използва се и като клетъчна фабрика. BL21 и DH5 Alpha са две генетично модифицирани клетки на E. coli, които понастоящем се използват съответно за протеинова експресия и плазмидна трансформация.
Какво е BL21?
BL21 е генетично модифицирана компетентна E.coli клетка с дефицит на протеаза, използвана предимно за експресия на протеини. Е. coli BL21 е бактериална клетка, получена от щам B. Има дефекти на Lon протеаза и ompT протеаза на външната мембрана. Обикновено се използва за експресия на рекомбинантен протеин, тъй като обикновено осигурява стабилност на експресираните протеини. BL21 е полезен за протеинова експресия с pCold I-IV ДНК и pCold TF ДНК. Но тази компетентна клетка на Е. coli не е предназначена за система за експресия на протеин, използваща Т7 промотор като pET система. Причината за това е, че BL21 не експресира Т7 РНК полимераза. Освен това не се препоръчва да се използва за конструиране или приготвяне на плазмид, тъй като той няма recA мутация.
Фигура 01: BL21
BL21 е описан за първи път от Studier през 1986 г. след различни модификации на B линия. BL21 клетките имат дефицит на LON протеаза, която разгражда много чужди протеини. Освен това липсва друг ген, който кодира протеазата на външната мембрана (OmpT), чиято функция е да разгражда извънклетъчните протеини. Липсата на тези протеини задейства успешното производство на чужд протеин в клетките на Е. coli BL21. Освен това hsdSB мутацията в тези клетки предотвратява метилирането на чужда ДНК и разрушаването в клетките BL21.
Какво е DH5 Alpha?
DH5 Alpha е генетично проектирана компетентна клетка на E. coli с recA1 мутация, която се използва предимно за плазмидна трансформация. Клетките DH5 Alpha E. coli са генетично конструирани от американския биолог Дъглас Ханахан, за да се увеличи максимално ефективността на трансформацията. DH5 Alpha клетката има три различни мутации: recA1, endA1 и lacZΔM15. recA1 е едноточкова мутация, която замества глицин 160 с остатък от аспарагинова киселина в recA полипептида. Тази мутация дезактивира активността на рекомбиназите и инактивира хомоложната рекомбинация. endA1 мутацията инактивира вътреклетъчна ендонуклеаза, която я предпазва от разграждане на вмъкнатия плазмид.
Фигура 02: DH5 Alpha
Освен това, мутацията на lacZΔM15 позволява синьо-бял скрининг на трансформирани клетки. Тези клетки са компетентни клетки. Те често се използват с трансформация на калциев хлорид за вмъкване на желания плазмид. От последните изследвания беше установено, че DH5 Alpha клетката с метода Hanahan е най-ефективната компетентна клетка за плазмидна трансформация.
Какви са приликите между BL21 и DH5 Alpha?
- BL21 и DH5 Alpha са две генетично модифицирани E.coli
- И двете са компетентни клетки.
- Те се състоят от различни мутации.
- И двете нямат естествено местообитание.
- Те се използват за лабораторни цели като изследвания на експресията и процедури за клониране.
Каква е разликата между BL21 и DH5 Alpha?
BL21 е генетично модифицирана компетентна клетка на E. coli с дефицит на протеаза, използвана предимно за експресия на протеини. От друга страна, DH5 Alpha е генетично проектирана компетентна клетка на E. coli с recA1 мутация, използвана основно за плазмидна трансформация. И така, това е ключовата разлика между BL21 и DH5 Alpha. Освен това клетката BL21 E. coli няма мутация на recA1, докато клетката DH5 Alpha E. coli има мутация на recA1.
Следващата инфографика изброява разликите между BL21 и DH5 Alpha в таблична форма.
Резюме – BL21 срещу DH5 Alpha
Непатогенните щамове на E. coli са генетично разработени от учени за лабораторни изследвания на експресията и за целите на клонирането. BL21 и DH5 Alpha са две генетично модифицирани клетки на E. coli. BL21 се използва предимно за изследвания на протеиновата експресия. От друга страна, DH5 Alpha се използва предимно за целите на плазмидна трансформация. Така това е обобщението на разликата между BL21 и DH5 Alpha.
