Ключова разлика – нитроцелулоза срещу найлонова мембрана
Блотингът е важна техника за откриване на специфични последователности на ДНК, РНК и протеини от техните смеси в молекулярната биология. Извършва се с помощта на мембрана, наречена блот. Има различни техники за попиване, като северно, южно и западно попиване. Изборът на подходяща мембрана за процеса на попиване трябва да се извърши внимателно, за да се предотврати неспецифично свързване и грешни откривания. Нитроцелулозата, найлонът и PVDF са често използвани мембрани в техниките за попиване. Те имат различни характеристики. Ключовата разлика между нитроцелулозната и найлоновата мембрана е, че нитроцелулозните мембрани имат висок потенциал за имобилизиране на протеини, докато найлоновите мембрани имат висок потенциал за имобилизиране на нуклеинова киселина. И двата вида мембрани обаче често се използват в техниките за попиване.
Какво е нитроцелулозна мембрана?
Нитроцелулозната мембрана е често използван мембранен филтър в техниките за блотинг на нуклеинови киселини и протеини. Има висок потенциал за свързване с протеини. Следователно нитроцелулозните мембрани се използват широко в Western blotting техниката. Нитроцелулозните мембрани са съвместими с всички техники на хибридизация и показват превъзходен капацитет на свързване без смущения. Нитроцелулозните мембрани са естествено хидрофилни по природа. Те осъществяват хидрофилно взаимодействие с молекулите и ефективно ги имобилизират върху мембраната. Търговските нитроцелулозни мембрани се предлагат в два размера на порите: 0,45 и 0,2 µm.
Фигура 01: Нитроцелулозна мембрана, използвана при уестърн блотинг
Какво е найлонова мембрана?
Найлоновата мембрана е друг тип търговска мембрана, използвана в техниките за попиване. Алтернативно се използва с нитроцелулозни мембрани за южно и северно попиване. Найлоновите мембрани са идеални за Southern blotting от нитроцелулозата поради високия им афинитет към свързване с ДНК. Поради няколко уникални характеристики на найлоновите мембрани, изследователите обикновено използват найлонови мембрани за южно и северно попиване вместо върху нитроцелулозна мембрана. Найлоновите мембрани също се препоръчват за отстраняване и повторно сондиране, за разлика от нитроцелулозата.
Фигура 02: Найлонова мембрана, използвана за южно попиване
Каква е разликата между нитроцелулоза и найлонова мембрана?
Нитроцелулоза срещу найлонова мембрана |
|
| Нитроцелулозните мембрани са крехки. | Найлоновите мембрани са по-малко чупливи. |
| Обработка | |
| Трудни са за боравене. | Лесно се боравят. |
| Reprobing | |
| Неподдържаните нитроцелулозни мембрани са трудни за повторно изследване. | Повторното изследване е лесно с найлонови мембрани. |
| Съвместимост с различни условия на съхранение | |
| Нитроцелулозните мембрани имат по-малка здравина, за да издържат на различни условия на съхранение. | Найлоновите мембрани реагират по-стабилно на различни условия на съхранение. |
| Използване | |
| Изисква се предварително намокряне. | Предварително навлажняване не е необходимо за найлонови мембрани. |
| Хидрофилна природа | |
| Нитроцелулозните мембрани са хидрофилни по природа, но са по-малко хидрофилни от найлоновите мембрани. | Те са силно хидрофилни по природа. |
| Потенциал за обездвижване | |
| Нитроцелулозните мембрани имат по-малък афинитет към нуклеиновите киселини. Но има висок афинитет към протеините. | Найлоновите мембрани имат висок потенциал за свързване с нуклеиновите киселини в сравнение с нитроцелулозните мембрани. |
Обобщение – нитроцелулоза срещу найлонова мембрана
Нитроцелулозните и найлоновите мембрани са специални листове, използвани в техниката на попиване за възпроизвеждане на шарката на ивици върху гела. Те дават възможност за откриване на специфична последователност или протеин от смесите чрез имобилизирането им върху мембраната. След като молекулите се имобилизират върху мембраната, тя може да се използва като субстрат за хибридизационен анализ с белязани сонди. Нитроцелулозната мембрана обикновено се използва за откриване на протеини в Western blotting техниката поради високия си афинитет на свързване с протеини. Найлоновите мембрани често се използват за южно и северно попиване. Това е разликата между нитроцелулозната и найлоновата мембрана.
