Ключова разлика – Напред срещу обратен буквар
Полимеразната верижна реакция (PCR) е метод за усилване на ДНК, който се използва в молекулярно-биологични приложения. Това е често използвана техника, която прави милиони до милиарди копия на особено интересуваща ДНК последователност. Това е ин витро метод, който се извършва в лаборатории. PCR техниката е изцяло зависима от комерсиално произведената ДНК полимераза, наречена Taq полимераза. И също така изисква няколко други компонента и правилно поддържане на температурата. Един важен компонент са грундовете. Праймерите са късите ДНК последователности, специално проектирани за целевата ДНК последователност. Те обикновено са с дължина около 20 нуклеотида. Taq полимеразата катализира добавянето на нуклеотиди към предварително съществуваща нуклеотидна последователност. Следователно, праймерите служат като отправни точки за синтеза на нови вериги. Taq полимеразата работи само в посока 5' към 3', следователно синтезът на ДНК се извършва в същата посока 5' към 3'. Тъй като ДНК е двуверижна, в PCR са необходими два вида праймери. Те са известни като преден праймер и обратен праймер. Правите и обратните праймери се наричат въз основа на посоката на удължаване на праймера в ДНК, когато се извършва ДНК синтез. Предният праймер се свързва с антисенс ДНК веригата и инициира синтеза на +ve верига на гена в посока 5' към 3'. Обратният праймер се свързва със сетивната верига и инициира синтеза на комплементарната верига на кодиращата верига; което е -ve нишката на гена в посока 5'към 3'. Това е ключовата разлика между предните и обратните праймери.
Какво е Forward Primer?
Ориентацията напред е синтезът на кодиращата верига или сетивната верига на ген. Taq полимеразата катализира синтеза на нова верига в посока 5' към 3'. Синтезът на кодираща верига се случва, когато праймерът се свърже с некодиращата или антисенс веригата и се удължи в посока 5' към 3'.
Фигура 01: Прави и обратни праймери
Праймерът, който се свързва с антисенс веригата или некодиращата верига, или шаблонната верига, е известен като преден праймер, тъй като предният праймер действа като отправна точка за синтеза на кодиращата или положителната верига на гена. Предният праймер има къса нуклеотидна последователност, която е комплементарна на 3' страничния край на антисенс веригата. Той хибридизира с антисенс веригата и улеснява Taq полимеразата да добави нуклеотиди, които са комплементарни към шаблонната верига.
Какво е обратен буквар?
Обратният праймер е късата ДНК последователност, която се свързва с 3’-края на сетивната верига или кодиращата верига. Обратният праймер служи като отправна точка за синтезиране на комплементарна верига на кодиращата последователност или некодиращата последователност. Обратният праймер е проектиран като допълнение към 3'-края на кодиращата нишка. Следователно, той се отгрява с фланкиращия 3' край на кодиращата верига и позволява на Taq полимеразата да синтезира антисенс веригата или шаблонната верига. Тъй като ориентацията му е обърната, този праймер е обозначен като обратен праймер.
Както обратните, така и правите праймери са важни за производството на милиони до милиарди копия на определени региони на ДНК, които са насочени или заинтересовани.
Какви са приликите между предния и обратния буквар?
- Както правите, така и обратните праймери са направени от олигонуклеотиди.
- Както правите, така и обратните праймери притежават къса нуклеотидна последователност, комплементарна на страничните краища на двойните вериги на ДНК.
- Както правият, така и обратният праймер обикновено се състоят от 20 нуклеотида.
- В полимеразните верижни реакции се използват както правите, така и обратните праймери.
- Както правите, така и обратните праймери се синтезират в търговската мрежа.
- Както предните, така и обратните праймери са температурно стабилни и обикновено имат подобна Tm.
- Както правите, така и обратните праймери се отгряват с целевите ДНК последователности.
- Както правите, така и обратните праймери са проектирани в съответствие с PCR реакциите.
- Както правите, така и обратните праймери служат като отправни точки за амплификация на ДНК.
- Както обратните, така и правите праймери са важни за производството на милиони копия на определени региони от целеви или заинтересовани ДНК последователности.
Каква е разликата между предния и обратния буквар?
Праймер срещу обратен праймер |
|
| Праймерът е късата ДНК последователност, която хибридизира с 3' края на некодиращата или шаблонната верига на гена и служи като отправна точка за синтезиране на кодиращата последователност. | Обратният праймер е късата ДНК последователност, която хибридизира с 3' края на кодиращата или нешаблонната верига и служи като отправна точка за синтезиране на некодиращата последователност. |
| Нишка за отгряване | |
| Напред праймер загрява с шаблонна нишка. | Обратният праймер се загрява с нишката без шаблон. |
| Получаване на нова последователност | |
| Напред праймерът улеснява синтеза на кодиращата последователност. | Обратният праймер улеснява синтеза на некодиращата последователност. |
Резюме – Напред срещу обратен буквар
Има два вида праймери, включени в PCR техниката. Те са предни и обратни грундове. Въз основа на удължаването на праймера при синтеза на нова ДНК верига, тези праймери са етикетирани или наименувани. Taq полимеразата синтезира новата ДНК в 5' до 3' ориентация. Следователно праймерите са проектирани като допълнение към 3'-краищата на двойните нишки. Правият праймер, който се удължава в посока 5' към 3', хибридизира с 3' края на антисенс или шаблона, или некодиращата последователност. Той служи като отправна точка за синтезиране на кодираща последователност. Обратният праймер, който се удължава в посока 5' към 3', се хибридизира с 3' края на кодиращата или нешаблонната, или сенс веригата. Той служи като отправна точка за синтезиране на некодиращата последователност. Това е разликата между преден и обратен грунд.
