Ключова разлика – RNASE A срещу RNASE H
Рибонуклеазите са нуклеази, които специфично разграждат РНК до по-малки единици. Те могат да бъдат разделени на две категории; ендорибонуклеази и екзорибонуклеази. Ендорибонуклеазата е ендонуклеаза, която може да разгради едноверижна или двойноверижна РНК. Той разцепва фосфодиестерните връзки в полинуклеотидната верига на РНК. Примерите са RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P и RNase H. Екзорибонуклеазата е екзонуклеаза, която разгражда РНК чрез премахване на крайни нуклеотиди от 5'-края или 3'-края на молекулата на РНК. Примерите са RNase R, RNase II, RNase D и RNase PH. Ключовата разлика между RNASE A и RNASE H е, че RNase A е панкреатична рибонуклеаза, която специфично разгражда едноверижната РНК на по-малки компоненти, докато RNase H е неспецифичен ензим, който разцепва РНК в РНК-ДНК хибрид на по-малки единици чрез хидролитичният механизъм.
Какво е RNASE A?
РНКаза А е панкреатична рибонуклеаза, която специфично разцепва несдвоените цитозинови и урацилови остатъци в 3’-края на едноверижната РНК. РНКаза Н действа при по-висока концентрация на сол (0,3 М или по-висока концентрация на NaCl). Хидролитичната реакция е в два етапа. Той образува 3' фосфорилиран продукт чрез 2', 3' цикличен монофосфат междинен продукт. Въпреки че е специфичен за едноверижна РНК при по-висока концентрация на сол, той може също да разгради двойноверижна РНК и РНК в РНК-ДНК хибрид при по-ниска концентрация на NaCl (по-ниска от 0,3M NaCl).
Bruce Merrifield първи синтезира този ензим. РНКаза А е много популярен ензим в молекулярните изследвания. Говежди панкреас РНКаза А е пример за РНКаза А. И това е един от най-устойчивите ензими, които се използват в лабораторията. Този ензим не се нуждае от кофактор за своята дейност. Той е силно термостабилен ензим. РНКаза А е първият ензим и третият протеин, към който е открита правилна аминокиселинна последователност. Този ензим е много малък със 124 аминокиселини и молекулна маса от 12600da. И има четири хистидинови остатъка (His 12 и His 119, които участват в каталитична реакция).
Фигура 01: RNase A
RNase A може да се изолира чрез кипене на сурова проба. Когато кипи, всички други ензими разграждат останалата РНКаза А. РНКаза А е удивително стабилен ензим. Този ензим инхибира с рибонуклеазен инхибитор протеин, тежки метали и уридин ванадатни комплекси.
Какво е RNase H?
РНКаза Н е неспецифичен рибонуклеазен ензим, който може да разгради РНК в РНК-ДНК хибрид чрез хидролитична реакция. РНКаза Н разцепва 3’-О-Р връзката на РНК в РНК-ДНК хибрид. В крайна сметка той произвежда 3'OH и 5' фосфатни крайни продукти. В репликацията на ДНК той играе централна роля чрез премахване на праймера на РНК след формирането на нови вериги на ДНК. В лабораторни условия той специфично разгражда РНК в РНК-ДНК хибрид, но не и ДНК и нехибридизирана РНК. И този ензим обикновено се използва за унищожаване на РНК матрицата, след като първата комплементарна ДНК верига се образува по време на синтеза на кДНК.
Фигура 02: RNase H
RNase H също се използва в тестове за нуклеазна защита. Той може също да бъде включен в отстраняването на поли А опашка от иРНК. РНКаза Н има способността да разрушава некодиращата РНК вътре и извън клетката. Металните йони са необходими като кофактори за тази протеинова активност. Хелатор (EDTA) може да се използва за инхибиране на RNase H ензима.
Какви са приликите между RNASE A и RNASE H?
- И двете са протеини по природа.
- И двете са ендорибонуклеаза
- И двете могат да разграждат РНК.
- И двете извършват хидролитични реакции.
- Молекулярните лаборатории използват и двете.
Каква е разликата между RNASE A и RNASE H?
RNASE A срещу RNASE H |
|
| RNase A е панкреатична рибонуклеаза, която специфично разцепва 3'-края на несдвоени цитозинови и урацилови остатъци на едноверижна РНК при по-висока концентрация на сол. | RNase H е неспецифичен рибонуклеазен ензим, който може да разгради РНК в РНК-ДНК хибрид чрез хидролитична реакция. |
| Природа на разцепването на РНК | |
| RNase A специфично разцепва едноверижна РНК при по-висока концентрация на сол. | RNase H разцепва РНК в РНК-ДНК хибрид. |
| Необходимост от кофактори за активност | |
| RNase A не се нуждае от кофактори за своята активност. | RNase H се нуждае от метални йони като кофактори за своята активност. |
| Инхибитори на протеиновата активност | |
| Протеиновият инхибитор на рибонуклеазата, комплексите от тежки метали и уридин ванадат инхибират активността на RNAse A. | Хелатор (EDTA) инхибира активността на RNase H. |
| Премахване на РНК праймер при репликация на ДНК | |
| RNase A не се използва за отстраняване на РНК праймер при репликация на ДНК. | RNase H се използва за отстраняване на РНК праймер при репликация на ДНК |
| Отстраняване на шаблон на ДНК при синтез на допълнителна ДНК (C-DNA) | |
| RNase A не се използва за отстраняване на РНК матрица по време на комплементарния синтез на ДНК (C-DNA). | RNase H се използва за отстраняване на РНК матрица по време на синтеза на комплементарна ДНК (C-DNA). |
| Отстраняване на Poly-A-Tail в иРНК, хибридизирана към Oligo (dt) | |
| RNase A не се използва за премахване на "поли-А опашка" в иРНК, хибридизирана към олиго (dt). | RNase H се използва за отстраняване на "поли-А опашка" в иРНК, хибридизирана с олиго (dt) |
Обобщение – RNASE A срещу RNASE H
Рибонуклеазите са нуклеазни ензими, които имат способността да разцепват РНК на по-малки единици. Те са два вида; ендорибонуклеази и екзорибонуклеази. Ендорибонуклеазата е ендонуклеаза, която има способността да разгражда едноверижна или двойноверижна РНК. И разцепва фосфодиестерната връзка в РНК полинуклеотидна верига. РНКаза А и РНКаза Н са две ендорибонуклеази. РНКаза А е панкреатична рибонуклеаза, която специфично разцепва несдвоени цитозинови и урацилови остатъци в 3’-края на едноверижната РНК при по-висока концентрация на сол. РНКаза Н е неспецифичен рибонуклеазен ензим, който може да разгради РНК в РНК-ДНК хибрид чрез хидролитична реакция. Това е разликата между RNase A и RNase H.
Изтеглете PDF RNASE A срещу RNASE H
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката за цитиране. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между RNASE A и RNASE H
