Ключова разлика – поточна цитометрия срещу FACS
В контекста на клетъчната теория клетките са основната структурна и функционална единица на всички живи организми. Сортирането на клетки е методология, която се използва за разделяне на различни клетки според физиологичните и морфологичните характеристики. Те могат да бъдат с вътреклетъчни или извънклетъчни характеристики. Взаимодействието на ДНК, РНК и протеини се считат за вътреклетъчни интерактивни свойства, докато формата, размерът и различните повърхностни протеини се считат за извънклетъчни свойства. В съвременната наука методологиите за сортиране на клетки са довели до подпомагане на различните изследвания в биологичните изследвания, а също и при установяването на нови принципи чрез изследвания в медицината. Сортирането на клетките се извършва по различни методологии, които включват както примитивни с по-малко оборудване, така и усъвършенствани технологични методологии с използването на сложни машини. Поточна цитометрия, флуоресцентно активирано клетъчно сортиране (FACS), магнитна клетъчна селекция и единично клетъчно сортиране са основните използвани методологии. Проточната цитометрия и FACS са разработени за диференциране на клетките според техните оптични свойства. FACS е специализиран тип поточна цитометрия. Поточната цитометрия е методология, която се използва по време на анализ на хетерогенна популация от клетки според различни молекули на клетъчната повърхност, размер и обем, което позволява изследването на единични клетки. FACS е процес, чрез който проба от смес от клетки се сортира според техните характеристики на разсейване на светлината и флуоресценция в два или повече контейнера. Това е основната разлика между поточната цитометрия и FACS.
Какво е поточна цитометрия?
Поточната цитометрия е метод, който се използва за изследване и определяне на експресията на вътреклетъчни молекули и клетъчната повърхност и за определяне и характеризиране на отделни типове клетки. Използва се и за определяне на клетъчния обем и размера на клетките и за оценка на чистотата на субпопулациите, които са изолирани. Това позволява многопараметрична оценка на единични клетки приблизително по едно и също време. Поточната цитометрия се използва за измерване на интензитета на флуоресценцията, която се получава поради флуоресцентно белязани антитела, които помагат да се идентифицират протеини или лиганди, които се свързват със свързани клетки.
Фигура 01: Поточна цитометрия
Общо взето, поточната цитометрия включва главно три подсистеми. Те са флуидиката, електрониката и оптиката. В поточната цитометрия има пет основни компонента, които се използват при сортиране на клетки. Те са проточна клетка (поток от течност, който се използва за тяхното транспортиране и подравняване на клетките за процес на оптично отчитане), система за измерване (може да бъде от различни системи, включително живачни и ксенонови лампи, високомощни водно охлаждане или лазери с въздушно охлаждане с ниска мощност или диодни лазери), ADC; Система за аналогово-цифров преобразувател, система за усилване и компютър за анализ. Придобиването е процесът, чрез който данните се събират от пробите с помощта на поточен цитометър. Този процес се медиира от компютър, който е свързан с флоуцитометъра. Софтуерът, присъстващ в компютъра, анализира информацията, подадена към компютъра от поточния цитометър. Софтуерът също така има способността да регулира параметрите на експеримента, контролирайки проточния цитометър.
Какво е FACS?
В контекста на поточната цитометрия, флуоресцентно-активираното сортиране на клетки (FACS) е метод, който се използва за диференциране и сортиране на проба от смес от биологични клетки. Клетките са отделени от два или повече контейнера. Методът на сортиране се основава на физическите характеристики на клетката, което включва разсейване на светлината и флуоресцентни характеристики на клетката. Това е важна научна техника, която може да се използва за получаване на надеждни количествени и качествени резултати от флуоресцентни сигнали, които се излъчват от всяка клетка. По време на FACS, първоначално, предварително получената смес от клетки; суспензия се насочва към центъра на тесен поток от течност, който тече бързо. Потокът от течност е проектиран да разделя клетките в суспензията въз основа на диаметъра на всяка клетка. Към потока суспензия се прилага механизъм на вибрация, което води до образуването на отделни капчици.
Фигура 02: FACS
Системата е калибрирана, за да създаде една капчица с една клетка. Точно преди образуването на капчици, течащата суспензия се движи по протежение на апарат за измерване на флуоресценция, който открива флуоресцентната характеристика на всяка клетка. В точката на образуване на капчици се поставя пръстен за електрическо зареждане, който се индуцира към пръстена преди измерването на интензитета на флуоресценцията. След като капките се образуват от суспензионния поток, зарядът се улавя в капките, който след това влиза в електростатична отклоняваща система. В зависимост от заряда, системата отклонява капките в различни контейнери. Методът на прилагане на таксата варира в зависимост от различните системи, използвани в FACS. Оборудването, използвано в FACS, е известно като флуоресцентно активиран сортировач на клетки.
Каква е приликата между поточната цитометрия и FACS?
Поточната цитометрия и FACS са разработени за диференциране на клетките според техните оптични свойства
Каква е разликата между поточната цитометрия и FACS?
Поточна цитометрия срещу FACS |
|
| Поточната цитометрия е методология, която се използва по време на анализ на хетерогенна популация от клетки според различни молекули на клетъчната повърхност, размер и обем, което позволява изследването на единични клетки. | FACS е процес, чрез който проба от смес от клетки се сортира според техните характеристики на разсейване на светлината и флуоресценция в два или повече контейнера. |
Резюме – Поточна цитометрия срещу FACS
Клетката е основната структурна и функционална единица на всички живи организми. Клетъчното сортиране е процесът, чрез който клетките се изолират и диференцират в различни категории въз основа на техните вътреклетъчни и извънклетъчни свойства. Поточната цитометрия и FACS са две важни методологии при сортирането на клетките. И двата процеса са разработени, за да диференцират клетките според техните оптични свойства. Поточната цитометрия е методология, която се използва по време на анализ на хетерогенна популация от клетки според различни молекули на клетъчната повърхност, размер и обем, което позволява изследването на единични клетки. FACS е процес, чрез който проба от смес от клетки се сортира според техните характеристики на разсейване на светлината и флуоресценция в два или повече контейнера. Това е разликата между поточната цитометрия и FACS.
Изтеглете PDF версията на Flow Cytometry срещу FACS
Можете да изтеглите PDF версия на тази статия и да я използвате за офлайн цели според бележката за цитиране. Моля, изтеглете PDF версия тук Разлика между поточна цитометрия и FACS
