Ключовата разлика между радиоактивните и нерадиоактивните сонди е, че радиоактивните сонди са едноверижни ДНК или РНК последователности, които са маркирани с радиоактивни изотопи, докато нерадиоактивните сонди са едноверижни ДНК или РНК последователности, които са маркирани с химичен маркер или флуоресцентен етикет.
Хибридизацията на нуклеинова киселина е важна техника в молекулярната биология, особено в микробната диагностика. Помага за идентифициране или откриване на определена последователност на нуклеинова киселина. При тази техника нуклеиновите киселини се фиксират към твърда повърхност и се хибридизират със сонда. Сондата е фрагмент от ДНК или РНК, който е комплементарен на последователност от интерес. Ако целевата последователност присъства в пробата, сондата ще се хибридизира с нея и ще я направи откриваема. Има два вида сонди като радиоактивни и нерадиоактивни сонди. Следователно можем да маркираме сондите с радиоактивен етикет или флуоресцентен етикет.
Какво представляват радиоактивните сонди?
Радиоактивните сонди са едноверижни ДНК или РНК фрагменти с радиоактивен маркер. Радиоизотопите се използват при приготвянето на радиоактивни сонди. Радиоизотопите 32P, 33P и 35S обикновено се използват при етикетирането на сонди. Освен това радиоизотопите 3H и 1251 също се използват в по-малка степен при маркирането на сонди. Но те се използват за специфични приложения. Сред различните радиоизотопи 32P е най-често използваният изотоп при маркиране на радиоактивни сонди.
Радиоактивните сонди осигуряват по-висока степен на надеждност и специфичност. Следователно те осигуряват максимална чувствителност и позволяват точно количествено определяне на целевите последователности. Има обаче няколко недостатъка, свързани с радиоактивните сонди. Те имат кратък полуживот. Освен това те са опасни и производството, употребата и изхвърлянето са проблематични при боравене. Освен това подготовката на радиоактивна сонда е скъп процес. Следователно, поради проблеми с безопасността и цената, радиоактивните сонди не се използват като нерадиоактивни сонди в днешно време.
Какво представляват нерадиоактивните сонди?
Нерадиоактивните сонди са вторият тип сонди, които са химически етикетирани. Дигоксигенинът е нерадиоактивна проба, която е базиран на антитяло маркер. Дигоксигениновите сонди са специфични и чувствителни. Биотинът е друг етикет, използван при подготовката на нерадиоактивни проби. Системите за откриване на биотин/стрептавидин и дигоксигенин/антитела са най-често използваните нерадиоактивни сонди при хибридизация. Освен това пероксидазната система от хрян е друга нерадиоактивна система за сонда. След като тези нерадиоактивни сонди са хибридизирани с целевите последователности, те могат да бъдат открити чрез авторадиография или други техники за изобразяване.
Фигура 01: Хибридизация с нерадиоактивни сонди
Нерадиоактивните сонди се използват по-често при хибридизация на нуклеинова киселина, отколкото радиоактивните сонди. Това е така, защото нерадиоактивните сонди не са свързани с опасни материали. Освен това, нерадиоактивните методи за откриване изискват по-кратки времена на експозиция за откриване на хибридизационния сигнал. Въпреки това, стъпките, включени в хибридизацията на ДНК с нерадиоактивни сонди, обикновено са досадни и отнемат време. Освен това наличните в търговската мрежа решения са скъпи.
Какви са приликите между радиоактивните и нерадиоактивните сонди?
- Радиоактивните и нерадиоактивните сонди са два вида сонди, използвани в хибридизацията на нуклеинова киселина.
- Те улесняват откриването на целевите последователности в пробата.
- И двата вида сонди са еднакво чувствителни и специфични.
Каква е разликата между радиоактивни и нерадиоактивни сонди?
Радиоактивните сонди са едноверижни ДНК или РНК последователности, белязани с радиоактивни изотопи, докато нерадиоактивните сонди са едноверижни ДНК или РНК последователности, белязани с химичен маркер. И така, това е ключовата разлика между радиоактивните и нерадиоактивните сонди. Освен това радиоактивните изотопи са опасни. Следователно радиоактивните сонди са значително опасни, докато нерадиоактивните не са опасни.
Освен това, друга разлика между радиоактивните и нерадиоактивните сонди са техните недостатъци. Краткият полуживот и опасностите, свързани с тяхното производство, употреба и изхвърляне, са недостатъците на използването на радиоактивни сонди. От друга страна, стъпките, включени в хибридизацията на ДНК с нерадиоактивни сонди, обикновено са досадни и отнемат време.
По-долу инфографиката показва още сравнения, свързани с разликата между радиоактивни и нерадиоактивни сонди.
Обобщение – Радиоактивни срещу нерадиоактивни сонди
Пробата е фрагмент от ДНК или РНК, който съдържа нуклеотидна последователност, която е комплементарна на интересуващата ни последователност. За да се открие целевата последователност, сондите могат да бъдат маркирани радиоактивно, флуоресцентно или химически. Сондите се свързват с комплементарни последователности в пробата. Радиоактивните сонди са белязани с радиоактивни изотопи, докато нерадиоактивните сонди са белязани с биотин, дигоксигенин или пероксидаза от хрян. Следователно това е ключовата разлика между радиоактивните и нерадиоактивните сонди.
